DH5α感受态细胞 DH5α Chemically Competent Cell

保存条件： -80℃ 产品规格: DH5α 10×100μl pUC19（control vector） 10pg/μl 10μl F-φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1 phoADH5α菌株是实验室最常用的感受态细胞。 缺失核酸内切酶(endA)，提高了质粒 DNA 的产量 和质量；重组酶缺陷型(recA)减少插入片段的同源重组概率，保证了插入 DNA 的稳定性；lacZΔM15 的存在使 DH5α可用于蓝、白斑筛选。 DH5α菌株的缺点是生长缓慢，37℃需培 12-14 小时才能看见克隆；如需加快试验速度，请选用 TG1， Mach1-T1，XL10-Gold 等生长速度快的感受态细胞。 High5TM 系列 DH5α感受态细胞经特殊工艺制作，经 pUC19 质粒检测转化效率约 1× 109cfu/μg。 1.  DH5α感受态细胞放置冰中融化（或放手心或室温片刻，待菌体处于冰水混合状态时迅速 插入冰中），加入目的 DNA（质粒或连接产物）并用手拨打 EP 管底轻轻混匀，冰上静置 25 分钟。 2. 42℃水浴热激 45 秒，迅速放回冰上并静置 2 分钟，晃动会降低转化效率。 基 因 型 简 要 说 明 操3. 向离心管中加入 700μl 不含抗生素的无菌培养基（2YT 或 LB），混匀后 37℃，200 rpm 复苏 60 分 钟。 4. 5000rpm 离心一分钟收菌，留取 100μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应 抗生素的 2YT 或 LB 培养基上。 5.将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放 37℃培养至少 17h。 1.感受态细胞最好在冰上融化。 2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。 3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。