F-TOP10 快速转化感受态细胞

产品规格: F-TOP10 10×100μl pUC19（control vector） 10pg/μl 10μl F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 araΔ139Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL (Strr)endA1 nupG TOP10 菌株来源于 MC1061，是目前实验室最常用的感受态细胞之一，基因型与 DH10B 高度类似 (DH10B 为 galE15 型，而 TOP10 为 galU 型)。TOP10 生长速度快，37℃，10 小时可见克隆。recA1 和 endA1 的突变有利于插入 DNA 的稳定和高纯度质粒 DNA 的提取。可用于构建克隆，蓝白斑筛选等实验。1. 提前 15 分钟将用到的筛选培养基平板拿到 37℃预热 基 因 型 简 要 说 明 快速转化操作方法 (10min) 2. F-TOP10 感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5 分钟后待菌块融化，加入目的 DNA（质粒或连接产物）并用 手拨打 EP 管底轻轻混匀,，冰中静置 5 分钟。3. 用 200μl 枪将感受态细胞-DNA 混合物转移到已经 37℃预热的 2YT 或 LB 培养基上。4. 将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放 37℃培养至少 13 h。1. F- TOP10 感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5 分钟后待菌块融化，加入目的 DNA (质粒或连接产物)并用 手拨打 EP 管底轻轻混匀,，冰中静置 5 分钟。2. 42℃水浴热激 45 秒，迅速放回冰上并静置 2 分钟 (晃动会降低转化效率)。加入 700 μl 不含抗生素的 LB，37℃， 200 rpm 复苏 10 分钟，涂板 (均匀，表面无水渍)。3. 将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放 37℃培养至少 15h。1. F-TOP10 快速转化感受态细胞也可进行热激操作，对于>7 kb 质粒的构建，为了提高转化效率可按以下步骤操作： F-TOP10 感受态细胞从-80℃拿出，插入冰中，5 分钟后，加入目的 DNA 并用手拨打 EP 管底轻轻混匀，冰中静置 20 分钟。42℃水浴热激 45 秒，迅速放回冰中静置 2 分钟。加入 700 μl LB，37℃，200 rpm 复苏 30 分钟，涂板。 2. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中 8 分钟内加入目标 DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降 低转化效率，混入目的 DNA 时应轻柔操作。 3. F- TOP10 快速转化感受态细胞涂氨苄/羧苄青霉素抗性平板时效率较高，若涂卡那霉素或其他抗生素平板，转化效 率下降(因无孵育步骤，卡那霉素等对菌体毒性较大)。若要提高卡那霉素或其他抗性质粒的转化效率，可按热激转化操 作，增加孵育步骤。