多肽组合化学技术的常用方法与实例-多针法与茶袋法-分子生物学服务 -技术服务-生物在线
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多肽组合化学技术的常用方法与实例-多针法与茶袋法

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产品名称: 多肽组合化学技术的常用方法与实例-多针法与茶袋法

英文名称: 多肽组合化学技术的常用方法与实例

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 1多针法(Multipin synthesis)聚乙烯针状小棒为固相载体,先在小棒一端联上连肽结构另一端则固定于板上,每块板可固定几十支平行排列的小棒,注意排列要规则,两针间距离适宜。反应时将此板小棒头浸于相对应滴度板滴度槽中进行缩合反应,整个过程采用Merrifield标准合成方法完成,最后脱去保护基,但不从载体上切下抗原肽链,让肽段悬挂于树脂上可多次重复的进行活性研究。实例:1985年Geysen等以口蹄疫病毒抗原决定簇为目标,配以灵敏的ELISA分析法(准确度在10-12mol水平,而每根小棒端可合成肽量至少在10-9mol以上)。将针尖表面接上H2N-b-Ala-Lys (oMe)-NH-连肽结构后以96(8*12排)排列固定在一块板上,与带有96穴的滴度板匹配,进行接肽反应,完成六肽片段的一位差同步多重合成后,肽链脱除保护基,仍挂在小棒上,直接进行ELISA检测即带有肽链小针的固定板浸入标记酶液中进行抗原体反应,形成酶标记抗原抗体复合物,利用抗原抗体物对标记酶产生的调节(抑制或恢复活性)或显色反应,计算被检物含量,以检出含量最高即是亲合力最强的区域为高活性,将此区小棒取下,裂解肽段,纯化再进行杭体/受体/酶结合实脸。Geysen等3年用此法合成了20万个肽类似物,完成了此抗原肽库的筛选。1988年Geysen又系统地完成了鲸红蛋白肽链上各可能的6肽片段的免疫原,找到较可靠的抗原决定簇部位,检侧了其中一个免疫活性片段(5肽)被20种氨基酸进行任意置换的有效性。正丙醛

 
2茶袋法(Tea-bag method)以带微孔(74um )聚乙烯或聚丙烯网为容,装入固相载体。反应时将数小袋浸入同一反应器溶剂中,进行脱保护一洗涤一缩合循环的固相接肽反应,反应完成一步,若下一个氨基酸不同,可将某些小袋取出投入另一反应器中进行下步接肽反应,最后以每小袋为一个组合,裂解游离相关肽段,进行生物活性筛选。例:Houghten用此法合成了一个六肽库,该库由18个分库组成,每个分库又由18组混合肽组成。这样每组的前两个氨基酸是确定的,即分别为18个2-氨基酸中的一个,表示为AC-0102 X X X X -NH2,每组共含有204个肽片,通过ELISA检测找到活性最高的一组肽片然后即可建立AC-0123 X X X肽库,找出活性高于平均值的一组,以确立第三个氨基酸03,以此作为下一轮合成与筛选的目标,如此进行四次,五次选代筛选,即可确定活性最高的肽片的氨基酸组成,这个过程约需4周。此法配合电脑“分检”可进一步提高操作效率,合成中还可将D-型氨基酸组合进抗原肽链,以提供足够量供药理筛选的自由肽。多肽合成应用表明,茶袋法对抗原决定簇分析,肽激素分子研究,蛋白质片段构象描述具有重要意义。