服务概述

均一化cDNA文库指原不同丰度基因的cDNA拷贝数通过DSN酶处理等方法而相互接近后构建的文库，相对提高了细胞中大部分低丰度基因的转录本在文库中的拷贝数，克服了基因转录水平上的差异给文库筛选和分析带来的障碍，大大增加了低丰度基因的检出或克隆几率，也因此在EST测序过程中避免了大量相同cDNA克隆的干扰。

我们对外开展高质量的均一化cDNA文库构建服务，采用Clontech公司的CreatorTM SMARTTM cDNA Library Construction Kit与DSN酶作均一化处理相结合的技术构建文库。总 RNA抽提及mRNA纯化是最关键的第一步，必须保证RNA（mRNA）的完整性和纯度；其次是cDNA的均一化处理。 

样品要求

材料要求新鲜、RNA无降解；样品量：组织（2~3g），细胞（10 8），总RNA量50~100μg（>0.3μg/μl）或mRNA量2~3μg（>0.3μg/μl）；最低总RNA量为2~3μg（>300ng/μl），最低mRNA量为0.2~0.3μg（>30ng/μl）。其余详见“文库构建”中的要求。

服务流程

提取总RNA，纯化mRNA，合成cDNA第一链，单链cDNA的均一化处理，合成均一化的双链cDNA；或（材料有限的情况下）提取总RNA，合成cDNA第一链，合成双链cDNA，双链cDNA的均一化处理。然后将均一化的双链cDNA用SfiI酶切，连接到载体，转化或包装，扩增及保存。

完成时间

6~8周内完成。对于有些RNA难以抽提的材料或样品材料本身质量问题，时间较长，会在1周内和客户协商约定时间。

最终产品

1、产物电泳图谱； 

2、初始库，保存在-20℃；

3、文库评价的数据，包括库容量，滴度，插入片段的平均长度，重组效率。库容量：初始文库的滴度在1 ×106 以上，重组效率大于90% ；如果需要扩增，保证扩增后滴度在109 左右，库容量大于1×105。插入片段平均长度据不同物种情况而定，植物或高等动物文库的插入片段大于1Kb。

服务费用

询价