检测原理 :
Sequenom 公司DNA甲基化分析采用MassARRAY® EpiTYPER流程,该过程结合碱基特异性酶
切(分子切割)和MALDI-TOF检测原理,可实现多重CpG的分析检测,同时具有DNA甲基化定量分析
能力。
试验步骤:
1. 将待测DNA经过亚硫酸盐处理,DNA中未甲基化胞嘧啶(C)转变为尿嘧啶(U),而甲基化修饰的胞
嘧啶不变;
2. 通过PCR扩增过程引入T7-启动子序列,经T7 DNA聚合酶的体外转录过程得到各样本RNA产物;
3. 经过碱基特异性酶切处理,得到RNA小片段,并用飞行质谱检测每个片段的分子量,最后
EpiTYPER程序完成数据的自动化处理并报告每个检测片段的甲基化程度。
技术优势:
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高灵敏度:可发现低至5%甲基化修饰,样本起始量低至10 ng。
- 重复性好:CV≤5%。
- 高性价比:用384孔板进行 PCR 反应,一个扩增产物可以进行多重 CpG位点分析,数据无需后续验证,可直接发表结果。
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Wang, L., et al., Relation between hypomethylation of long interspersed nucleotide elements and risk of neural tube defects. American Journal of Clinical Nutrition, 2010, 91:1359-1367.