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特定 DNA 片段甲基化检测

特定 DNA 片段甲基化检测

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产品名称: 特定 DNA 片段甲基化检测

英文名称: 特定 DNA 片段甲基化检测

产品编号: HRSNP02

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Sequenom公司甲基化研究平台适合于特定DNA片段甲基化的研究。在经过全基因组甲基化芯片或启动子区甲基化芯片初步筛选后,对差异甲基化基因位点的技术验证和生物学独立验证;或者研究者已确立甲基化基因目标,或只对某些特定DNA甲基化的检测有兴趣的情形。
Sequenom公司DNA甲基化采用专业的引物设计软件,无需进行PCR 产物纯化,无需任何荧光标记,是研究几个到几百个甲基化位点的理想手段。

检测原理 :

  

       Sequenom 公司DNA甲基化分析采用MassARRAY® EpiTYPER流程,该过程结合碱基特异性酶

 

(分子切割)MALDI-TOF检测原理,可实现多重CpG的分析检测,同时具有DNA甲基化定量分析

 

能力。

 

 

试验步骤:

 

 

1. 将待测DNA经过亚硫酸盐处理,DNA中未甲基化胞嘧啶(C)转变为尿嘧啶(U),而甲基化修饰的胞

 

    嘧啶不变;

 

2. 通过PCR扩增过程引入T7-启动子序列,经T7 DNA聚合酶的体外转录过程得到各样本RNA产物;

 

3. 经过碱基特异性酶切处理,得到RNA小片段,并用飞行质谱检测每个片段的分子量,最后

 

    EpiTYPER程序完成数据的自动化处理并报告每个检测片段的甲基化程度。

 

 

技术优势:

 

  • 高灵敏度:可发现低至5%甲基化修饰,样本起始量低至10 ng
  • 重复性好CV≤5%
  • 高性价比:用384孔板进行 PCR 反应,一个扩增产物可以进行多重 CpG位点分析,数据无需后续验证,可直接发表结果。

 

参考文献:

  1. Wang, L., et al., Relation between hypomethylation of long interspersed nucleotide elements and risk of neural tube defects. American Journal of Clinical Nutrition, 2010, 91:1359-1367.