XL10-Gold Chemically Competent Cell XL10-Gold化学感受态细胞产品描述

XL10-Gold化学感受态细胞是经特殊工艺处理得到的感受态细胞，特别适合于大分子量DNA的高效转化。具有四环素和氯霉素抗性，使用Puc19质粒测得其转化效率达10⁸cfu/μg，主要具有如下特点：

① Hte表型可增强较大分子量质粒和连接产物的高效转化；

② 具有限制性内切酶缺陷性，更利于克隆 DNA 的稳定和高纯度质粒 DNA 的提取；

③ 更适于质粒文库的构建；

④ 具有lacIqZΔM15，可用于蓝、白斑筛选。

本品基因型：

Tet^rΔ(mcrA)183Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1 supE44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1 lac Hte [F´proAB lacI^qZΔM15 Tn10 (Tet^r) Amy Cam^r]。

 XL10-Gold Chemically Competent Cell XL10-Gold化学感受态细胞产品组分

运输与保存方法

干冰运输。

XL10-Gold化学感受态细胞-80℃保存，pUC19质粒-20℃保存。有效期半年。不能保存于液氮！

 XL10-Gold Chemically Competent Cell XL10-Gold化学感受态细胞注意事项

1）感受态细胞应保存在-80℃，不可反复冻融和放置时间过长，以免降低感受态细胞的转化效率。

2）整个转化操作，严格根据相应温度及无菌条件要求进行。

3）为确保最高转化效率，整个操作过程应尽量轻柔，并保持低温，且每次转化感受态使用量，不低于100μl。

4）为防止转化不成功，可以保留部分连接反应液，以重新转化，最低化实验可能遇到的风险。

 XL10-Gold Chemically Competent Cell XL10-Gold化学感受态细胞使用方法

1）取100 μl感受态细胞置于冰浴中融化。

2）向100μl感受态细胞悬液中加入0.1-50ng（＜10μl /100μl感受态）目的DNA或2μl连接产物，轻轻旋转离心管以混匀内容物，在冰浴中静置30min。

3）置于42℃水浴中热激30s，然后快速将管转移到冰浴中，冷却2-3min，该过程不要摇动离心管，否则会降低转化效率。

4）向离心管中加入900μl 42℃预热的无菌NZY⁺培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床振荡培养1h（225-250rpm），目的是促使菌体复苏。

   【注】：此步也可用LB培养基（不含抗生素）进行菌体复苏。

5）取上述≤200μl转化产物涂至含有相应抗生素的LB固体平板上，将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

【注】：如需做蓝白斑筛选，需至少孵育17h，以充分显色。