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表达株构建，突变体库构建

微生物过表达株，敲除株构建：

背景介绍：

基因是探究细菌结构和功能的基础，因此利用基因敲除技术验证细菌基因的功能一直是研究的热点。

细菌基因敲除的方法主要包括以下几种：

1.基因编辑技术（如CRISPR/Cas9）：利用特定的酶来切割和修改DNA序列，以删除或修改目标基因。

2.同源重组：将目标基因的上下游同源臂及筛选标记基因构建至合适载体中，然后将载体导入细菌胞内，使目标基因被替换或删除。

3.化学诱变：用化学物质处理细菌，使其基因发生突变，从而破坏该基因的功能。

4．转座子：利用转座子元件将外源DNA插入到宿主基因组中，从而破坏该基因的功能。

5.突变积累：将细菌培养在一系列条件下，让细菌自行发生突变，最终筛选出具有目标基因缺失或变异的菌株。

其中同源重组和基因编辑是直接针对目标基因构建敲除或定点突变的技术，也是锐志魔方生物构建细菌敲除株的主要方法。

方法流程

可承接菌株列表：

细菌名称
假单胞菌	链球菌
肺炎克雷伯菌	乳酸菌
肠杆菌	金黄色葡萄球菌
幽门螺旋杆菌	芽孢杆菌
鲍曼不动杆菌	谷氨酸棒状杆菌
脆弱拟杆菌	具核梭杆菌
牙龈卟啉单胞菌	其他革兰氏阳性菌
大部分革兰氏阴性菌	因篇幅原因其他细菌定制突变体文库请具体咨询

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参考文献：

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[2] Teixeira F L , Pauer H , Costa S B , et al. Deletion of BmoR affects the expression of genes related to thiol/disulfide balance in Bacteroides fragilis[J]. Scientific Reports, 2018, 8(1).

[3] Jinnethe R , Diana P , Tran T T , et al. A liaR Deletion Restores Susceptibility to Daptomycin and Antimicrobial Peptides in Multidrug-Resistant Enterococcus faecalis[J]. Journal of Infectious Diseases, 2015(8):1317.

[4]李晔, 张西轩, 郭梦征,等. 利用λRed重组系统敲除鼠伤寒沙门氏菌sopB基因[J]. 生物技术通报, 2014(9):7.