产品名称
            
            

            
产品编号
            
            

            
规格
            
            

            
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价格（元）
            
        
        

            

            
JC-1 Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit  JC-1线粒体膜电位检测试剂盒
            
            

            
40706ES60
            
            

            
100 tests（6孔板）
            
            

            
-20℃避光保存
            
            

            
800.00
            
        
    




产品描述




JC-1线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1 Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit）是一种以JC-1 为荧光探针，快速灵敏地检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位变化的试剂盒，可以用于早期的细胞凋亡检测，也是用来检测细胞早期凋亡的常用方法。
JC-1 是一种广泛用于检测线粒体膜电位△Ψm 的理想荧光探针，JC-1染料以电势依赖性的方式积聚在线粒体内。正常线粒体内，JC-1聚集在线粒体基质中形成聚合物，聚合物发出强烈的红色荧光（Ex=585 nm, Em=590 nm）；不健康的线粒体由于膜电位的下降或丧失，JC-1只能以单体的形式存在于胞浆中，产生绿色荧光（Ex=514 nm, Em=529 nm）。JC-1不仅可用于定性检测，因颜色的变化可以非常直接的反映出线粒体膜电位的变化。也可以用于定量检测，因线粒体的去极化程度可以通过红/绿荧光强度的比例来衡量。观察时，只需使用常规的观察红色荧光和绿色荧光的设置即可。
线粒体膜电势的破坏是细胞凋亡早期发生的一个标志性事件。细胞受到凋亡诱导后线粒体膜电位的变化使得膜的通透性发生改变。膜通透性的增加，使得线粒体蛋白包括细胞色素C、Smac/DIABLO、HtrA2/OMI、核酸内切酶G（EndoG）、凋亡诱导因子（AIF）等从线粒体基质释放到细胞浆。细胞色素C的释放伴随膜电位的完全丧失，进而引发细胞凋亡酶的级联效应。
本试剂盒提供了CCCP 作为诱导线粒体膜电位下降的阳性对照。对于六孔板中的样品，本试剂盒共可以检测100 个样品；对于12 孔中的样品，本试剂盒共可以检测200 个样品。


试剂盒组分






    

        

            

            
编号
            
            

            
组分
            
            

            
规格
            
            

            
保存方法
            
        
        

            

            
40706-A
            
            

            
JC-1(200×)
            
            

            
5× 100 μL/管
            
            

            
-20℃避光
            
        
        

            

            
40706-B
            
            

            
JC-1染色缓冲液（5×）
            
            

            
80 mL
            
            

            
-20℃避光，也可4℃保存
            
        
        

            

            
40706-C
            
            

            
CCCP（50 mM）
            
            

            
20 μL
            
            

            
-20℃避光
            
        
        

            

            
40706-D
            
            

            
超纯水
            
            

            
90 mL
            
            

            
4℃保存
            
        
    




运输与保存方法




冰袋（wet ice）运输。
-20℃避光保存，尽量避免反复冻融，有效期一年。超纯水和JC-1 染色缓冲液（5×）也可4℃保存。


使用说明




1. JC-1 染色工作液的配制
六孔板每孔所需 JC-1 染色工作液的量为1 mL，其他培养器皿的JC-1 染色工作液的用量以此类推；对于细胞悬液每50～100 万细胞需0.5 mL JC-1 染色工作液。取适量JC-1（200×），按照每50μL JC-1（200×）加入8 mL 超纯水的比例稀释JC-1。剧烈震荡充分溶解并混匀JC-1。然后再加入2 mL JC-1 染色缓冲液（5×），混匀后即为JC-1 染色工作液。
2. 阳性对照的设置
把试剂盒中提供的CCCP（50mM）推荐按照1∶1000 的比例加入到细胞培养液中，稀释至50 μM，处理细胞20分钟。随后按照下述方法装载JC-1，进行线粒体膜电位的检测。对于大多数细胞，通常50μM CCCP处理20 分钟后线粒体的膜电位会完全丧失，JC-1 染色后观察应呈绿色荧光；而正常的细胞经JC-1 染色后应显示红色荧光。对于特定的细胞，CCCP 的作用浓度和作用时间可能有所不同，需自行参考相关文献资料决定或优化体系摸索最优条件。
3.  对于悬浮细胞
1） 取10～60 万细胞，重悬于0.5 mL 细胞培养液中，细胞培养液中可以含血清和酚红。
2） 加入0.5 mL JC-1 染色工作液，颠倒数次混匀。细胞培养箱中37℃孵育20 分钟。
3） 在孵育期间，按照每1 mL JC-1 染色缓冲液（5×）加入4 mL 蒸馏水的比例，配制适量的JC-1 染色缓冲液（1×），并放置于冰浴。