OrigamiB(DE3)感受态细胞 OrigamiB(DE3) Chemically Competent Cell

产品规格: OrigamiB(DE3) 10×100μl pUC19（control vector） 10pg/μl 10μl F -ompT hsdSB(rB -mB -) gal dcm lacY1 ahpC (DE3) gor522::Tn10 trxB (KanR,TetR)  High5TM 系列 OrigamiB(DE3)感受态细胞包含突变的硫氧还蛋白还原酶（thioredoxin reductase）(trxB) 和谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase)(gor)基因，表达主要还原途径的两个关键 酶。有利于形成正确折叠的含有二硫键的蛋白，增强蛋白的可溶性。 该菌株染色体整合了λ噬菌体 DE3 区（DE3 区含有 T7 噬菌体 RNA 聚合酶），可同时表达 T7 RNA 聚 合酶和大肠杆菌 RNA 聚合酶，可用于 pET 系列，pGEX，pMAL 等质粒的蛋白表达，具有卡那霉素和 四环素抗性，不能用于具有卡那霉素抗性质粒的表达。 High5TM 系列 OrigamiB (DE3) 感受态细胞由特殊工艺制作，经 pUC19 质粒检测转化效率达 108cfu/μg。 1. 取 100μl 冰上融化的 OrigamiB(DE3)感受态细胞，加入目的质粒并轻轻混匀，冰上静置 25 分钟。 2. 42℃水浴热激 45 秒，迅速放回冰上并静置 2 分钟，晃动会降低转化效率。3. 向离心管中加入 700μl 不含抗生素的无菌培养基（2YT 或 LB），混匀后 37℃，200rpm 复苏 60 分 钟。 4. 5000rpm 离心一分钟收菌，留取 100μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的 2YT 或 LB 培养基上。 5. 将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养。 1.  感受态细胞最好在冰上融化。 2. 混入质粒时应轻柔操作。 3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。 4. 诱导时，IPTG 浓度可选（0.1-2mM 均可）。 5. 为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG 浓度需实验者优化。 6. 具有卡那霉素抗性，不能用于具有卡那霉素抗性质粒的表达。