RACE服务

服务简介

RACE是基于PCR技术由已知的部分cDNA顺序来获得完整cDNA5′和3′端的方法。分离和克隆基因是研究基因结构、功能以及表达的基础，通过建立和筛选cDNA文库来分离克隆目的基因的经典方法繁琐而且工作量大，而RACE则可以简单而有效的从低丰度转录本中快速扩增cDNA末端，从而获得目的基因全长cDNA序列。Invitrogen采用GeneRacer 试剂盒确保只有5’具有帽子结构，3’具有polyA全长cDNA才能扩增。

RACE原理

要获得cDNA3′末端, 以OligodT锚定引物为引物反转录总RNA得到cDNA，接着用SP5和PCR锚定引物进行PCR循环即可扩增得到cDNA链。扩增的特异性取决于SP5的碱基与目的cDNA分子互补。要获得cDNA5′末端，利用基因特异性引物SP1反转录总RNA, 分离反转录产物,用脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)加上poly(A)尾。以d(T)锚定引物和位于延伸引物序列上游的基因特异性扩增引物SP2进行PCR扩增。再用PCR锚定引物和特异性巢式引物SP3进行第二轮PCR扩增。将PCR产物克隆进质粒载体，进行测序。最后,从两个有相互重叠序列的3′和5′RACE产物来获得全长cDNA,或者通过分析RACE产物的3′和5′末端顺序,合成相应引物进行PCR扩增mRNA反转录产物来获得。

服务流程

1、总RNA提取

2、已知序列验证：依据客户提供的序列设计引物扩增，验证参考序列的存在及方向

3、5’和3’RACE

4、对获取的序列进行测序验证

客户提供

材料要求新鲜、RNA不能降解，总RNA样品不少于10μg

服务结果

1、构建好5’和3’RACE的TA克隆

2、产物SDS-PAGE图谱，产物测序结果

3、详细实验流程及反应条件

服务质量

获取的5’和3’RACE序列与已知序列连续存在于同一条cDNA片段上。