Mouse IL-11 ELISA KIT

品牌：Solarbio | 货号：SEKM-0011

背景介绍：

IL-11 由骨髓基质细胞产生，分子量约为 23KD，是造血微环境中一个多功能的调节因子。IL-11 可刺激浆细胞增殖及 T 细胞依赖的 B 细胞发育;促进巨核细胞的形成及成熟，提高外周血血小板数目;与 IL-3 和 IL-4 协同作用刺激休止期造血干细胞的增殖;影响红细胞的生成及分化;调节肝细胞血浆蛋白基因的表达，诱导急性期蛋白生成。

检测原理：

Solarbio (Solarbio ®)ELISA 试剂盒采用基于双抗体夹心法的酶联免疫吸附检测技术。将抗小鼠 IL-11 单克隆抗体包被在酶标板上；分别加入梯度稀释的标准品和预稀释的样本，标准品和样本中的小鼠 IL-11 会与酶标板上的包被抗体充分结合；洗板后加入生物素化抗小鼠 IL-11 抗体，该抗体会与板子上包被抗体捕获的标准品和样本中的小鼠 IL-11 发生特异性结合；洗板后加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素，生物素与链霉亲和素会发生高强度的非共价结合；洗板后加入显色剂底物 TMB，若反应孔中样品存在不同浓度的小鼠 IL-11，则 HRP 会使无色 TMB 变成不同深浅（正相关）的蓝色物质，加入终止液后反应孔会变成黄色；最后，在λmax=450 nm（OD=450 nm）处测定反应孔样品吸光度（OD），样本中的小鼠 IL-11 浓度与 OD 成正比，通过绘制标准曲线和四参数拟合软件便可计算出样本中小鼠 IL-11 的浓度。

原理图：

注意事项：※※※

1. 试剂盒应在有效期内使用，请不要使用过期的试剂。

2. 试剂盒未使用时应保存在 2-8℃冰箱，已复溶但未用完的标准品，请丢弃。

3. 试剂盒使用前请在室温恢复 30 min，且充分混匀试剂盒里的各种成份及制备的样品。

4. 在试验中标准品和样本建议作复孔检测，且加入试剂的顺序应保持一致。

5. 为避免交叉污染，请在试验中使用 1 次性试管，枪头，封板膜（※）及洁净塑料容器。.

6. 浓缩生物素化抗体和浓缩酶结合物的体积较少，在运输过程中微量液体会沾到管壁及瓶盖上，使用前请离心处理（5-10 S 即可），使管壁上的液体集中在管底部，取用时，请用移液器小心吹打几次。

7. 除了试剂盒中的浓缩洗涤液和终止液可以通用外，请不要使用其他来源试剂盒内含的试剂代替本试剂盒中的某单个组分。

8. 为保证结果准确，每次检测均需做标准曲线。

安全提示：

试剂盒中的终止液为酸性溶液，操作人员在使用时请带上手套并注意防护；在操作过程中也要避免试剂接触皮肤和眼睛，如果不慎接触，请用大量清水清洗；检测血液样本及其它体液样本时，请按国家生物实验室安全防护有关管理规定执行。

试剂盒组成及储存：

自备实验器材（不提供，可代购）

1．酶标仪（主波长 450nm，参考波长 630nm）

2．高精度移液器及一次性吸头：0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl

3．洗板机或洗瓶

4． 37℃孵育箱

5．双蒸水，去离子水，量筒等

6．稀释用聚丙烯试管

样本收集及储存：

1. 细胞培养上清：将细胞培养基移至无菌离心管，在 4℃条件下 1000×g 离心 10 min,然后将上清等量分装于小 EP 管并于-20℃下保存（24 小时内检测可放入 2-8℃储存），避免反复冻融。

2. 血清样本：室温血液自然凝固 20 min 后，在 4℃条件下 1000×g 离心 10 min，然后将上清等量分装于小 EP 管并于-20℃下保存（24 小时内检测可放入 2-8℃储存），保存过程中如有沉淀，请再次离心，避免反复冻融。

3. 血浆样本：将全血收集到含抗血凝剂的管中，根据标本的实际要求选择 EDTA，柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合 20 min，在 4℃条件下 1000×g 离心 10 min，然后将上清等量分装于小 EP 管并于-20℃下保存（24 小时内检测可放入 2-8℃储存），避免反复冻融。

※注意：

血清血浆样本避免使用溶血、高血脂样本，以免影响检测结果；如果样本中的靶标物检测浓度高于标准品的最高值，请将样品做适当倍数稀释后检测，建议正式实验前做预实验以确定稀释倍数。

试剂准备：

1. 试剂回温：首先在实验前 30 min 将试剂盒，待测样本放置于室温下，浓缩洗涤液如出现结晶，请放入 37℃温浴直到结晶全部溶解。

2. 配制洗涤液：预先计算好稀释后的洗涤液使用体积，然后用双蒸水或去离子水将 20 倍浓缩洗涤液稀释成 1 倍应用液，未用完的浓缩洗涤液放入 4℃冰箱保存。

3. 标准品梯度稀释：加入标准品/样本稀释液（SR1）1ml至冻干标准品中，静置15分钟待其完全溶解后轻轻混匀(浓度为8000pg/ml)，然后按照以下浓度：8000、4000、2000、1000、 500、 250、125、 0 pg/ml进行稀释。复溶过的标准品原液（8000pg/ml）未用完的应废弃或根据需要按照一次用量分装，并将其贮存在-20～-80℃冰箱，具体如下图。