selleck产品在文献中的引用:
Mol Cell Biol,2013, 33(12):2375-87
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生物活性
产品描述
SNX-2112 (PF-04928473)选择性结合到HSP90α和HSP90β的ATP结合袋中，Ka分别为30 nM和30 nM，比17-AAG更有效。
靶点
Hsp90α
Hsp90β
Grp94
Trap-1
 
 
IC50
30 nM (Ka)
30 nM(Ka)
4275 nM (Ka)
862 nM (Ka) [1]
 
 
体外研究
使用1 μmol/L SNX-2112处理BT-474 细胞，在处理3到6小时期间，导致HER2表达下调，而处理10小时，则导致HER2表达几乎完全丧失。SNX-2112处理，也导致全部Akt表达降低。SNX-2112作用于BT474, SKBR-3, SKOV-3, MDA-468, MCF-7 和 H1650癌细胞，抑制细胞增殖，IC50为10 到 50 nM。这些抗增殖作用与Rb的低磷酸化, G1期停滞，和凋亡的适度调节水平相关。[1] SNX-2112竞争性结合到Hsp90的N-末端ATP结合位点。SNX-2112通过caspase-8, -9,-3,和PARP裂解而诱导凋亡。SNX-2112抑制生长因子诱导的Akt和细胞外信号相关激酶(ERK)激活，也克服白细胞介素（IL-6）, 胰岛素样生长因子-1,和骨髓基质细胞诱导的生长优势。SNX-2112 通过废除eNOS/Akt通路而抑制人脐静脉内皮细胞管形成，也通过下调 ERK/c-fos 和PU.1而显著抑制破骨细胞形成。[2] 研究细胞系(8种来自骨肉瘤，神经母细胞瘤，肝母细胞瘤，和淋巴瘤的细胞系)对SNX-2112的敏感性，IC50为10-100 nM。高剂量 (70 nM) 导致抑制时间更长，sub-G1累积更多。观察到随着PARP 裂解增多，AKT1和C-Raf 的水平显著降低。[3]最新研究显示 NX-2112通过抑制Akt/mTOR/p70S6K而诱导自噬，这种作用存在时间和剂量依赖性。SNX-2112作用于人类黑色素瘤A-375细胞，显著诱导凋亡和自噬，说明 SNX-2112 可作为一种有效的靶向治疗剂。[4]
体内研究
SNX-2112是SNX-5422的药物前体，SNX-5422抑制MM细胞生长，延长移植瘤小鼠模型寿命，且抑制Hsp90，而SNX-2112不抑制MM细胞生长，但是在骨髓微环境中起作用而阻断血管生长和破骨细胞形成。[2]
特征
 
推荐的实验操作(此推荐来自于公开的文献所以Selleck并不保证其有效性)
激酶实验: [1]
ATP位移检测
蛋白亲和位移分析中，通过ATP联合的琼脂糖凝胶与Jurkat 细胞裂解液(快速冷冻，在盐水中进行匀浆) 在4oC温育而获得嘌呤基亲和树脂。然后与SNX-2112 温育90分钟。使用药物洗脱蛋白，通过SDS-PAGE溶解,进行银染色来观察，然后从凝胶中切除，用于 MS鉴定。脱色和胰蛋白酶消化后，使μC18 ZipTips提取肽，再进行洗脱，然后使用溶于50%乙*, 0.15%甲酸的α-*基-4-羟基肉桂酸饱和溶液将其点样到常规不锈钢基质辅助激光解吸电离/目标中。使用MALDI-TOF/TOF 4700蛋白质组学分析仪获得质谱。
细胞试验: [1]
细胞系
BT474, SKBR-3, SKOV-3, MDA-468, MCF-7 和 H1650 癌细胞
浓度
0-500 nM
处理时间
24 小时
方法
细胞按每孔2,000 到 5,000个细胞接种到96孔板中，孔中含完全培养基(200 μL)，然后使用SNX-2112处理24小时，测定细胞活力。每种药物浓度都测试8个孔。使用Alamar blue活性检测，温育96小时后，测定细胞。使用溴化乙锭进行核染色，通过Nusse 法分离，进行流式细胞仪技术。
动物实验: [2]
动物模型
皮下接种5 × 106 MM.1S 细胞的Fox Chase SCID 小鼠 (6-7周大)
配制
SNX-5422 溶于1% 羧甲基纤维素/0.5% Tween-80 ，浓度为10 mg/mL，储存于4oC，用于体内研究
剂量
20或40 mg/kg
给药处理
SNX-5422 口服处理，每周3次，一共3周。
溶解度
0.5% CMC/0.25% Tween 80, 30 mg/mL
参考文献
[1] Chandarlapaty S, et al, Clin Cancer Res, 2008, 14(1), 240-248.
[2] Okawa Y, et al, Blood, 2009, 113(4), 846-855.
[3] Chinn DC, et al, Pediatr Blood Cancer, 2012, 58(6), 885-890.
[4] Liu KS, et al, Cancer Lett, 2012, 318(2), 180-188.