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RNA提取及反转录

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产品名称: RNA提取及反转录

英文名称: RNA提取及反转录

产品编号: YK1372

产品价格: 80元/样

产品产地: 西安

品牌商标: Y&KBIO

更新时间: 2024-10-10T15:34:21

使用范围: null

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服务介绍: 细胞中的RNA可分为信使RNA、转运RNA和核糖体RNA三大类,不同组织总RNA提取实质就是将细胞裂解,释放出RNA,并通过不同方式去除蛋白、DNA等杂质,最终获得高纯RNA产物的过程。再在逆转录酶的催化下,随机引物、oligo(dT)或基因特异性引物的引导下合成互补的DNA (complementary DNA,cDNA)。 实验流程: 取材-RNA提取-测浓度-逆转录成cDNA 其中mRNA、lncRNA、circRNA为普通逆转录; miRNA采取特异性逆转录(需提供基因名称和种属,方便设计引物用于特异性逆转录 ),默认做茎环法的逆转录,如需做加尾法逆转录请特别备注说明。 样本收集: 1、细胞板贴壁细胞收集:    细胞弃培养上清,预冷PBS轻柔洗涤保证完全去除培养基。加少量预冷的PBS用细胞刮刀将细胞收集于冻存管,4℃1500rpm离心去除上清后得到细胞,置于液氮速冻。 2、细胞团块收集: 细胞团块加1ml PBS重悬(注意不要过于剧烈造成细胞破裂),4℃ 1000rpm离心5分钟,弃上清,重复3次,4℃1500rpm离心去除上清后得到细胞,置于液氮速冻。 3、悬浮细胞收集: 将培养完成的细胞,转移至EP管,1000rpm离心5分钟,弃上清,4℃1500rpm离心去除上清后得到细胞,置于液氮速冻。 裂解:贴壁细胞去除培养基后直接加trizol,团块和悬浮细胞在收集到细胞后加适量Trizol重悬(10^6细胞之内加1mlTrizol)。所有细胞样本在加入裂解液后需要用移液器吹打至无明显细胞残渣。 4.组织收集:取材应在冰上进行,取材后组织用生理盐水冲洗干净,去除血渍和污物,并剔除非研究所需的组织。取动物的组织,动作要求迅速,尽量避免样本在环境中暴露太久。 5.运输:使用大体积干冰运输; 6.取样量:细胞10^6以上,组织:50mg