【保存条件】

-20℃保存， 有效期 1 年。

【使用建议 （仅供参考） 】

1.  准备溶液： 室温融解试剂盒中的三种试剂， 溶解后立即放置在冰上， 混匀 。取适当量的 细胞浆蛋白抽提试剂 CE I/II 及细胞核蛋白抽提试剂 NE 备用， 在使用前数分钟内加入蛋白 酶抑制剂混合物及 PMSF， 使 PMSF 的最终浓度为 1mM（现配现用） 。

A:  对于贴壁细胞：用 PBS 洗一遍，用细胞刮子刮下细胞，或用EDTA 溶液处理细胞使细胞 不再贴壁很紧，并用移液器吹打下细胞。离心收集细胞，尽最大努力吸尽上清， 留下细胞沉 淀备用 。 （注： 尽量避免用胰酶消化细胞， 以免胰酶降解需抽提的目的蛋白 。）

B:  对于悬浮细胞： 用预冷的 PBS 清洗一遍， 离心收集细胞， 尽最大努力吸尽上清， 留下细 胞沉淀备用。

2.  每 20µL 细胞沉淀加入 200µL 添加了 PMSF 和蛋白酶抑制剂的细胞浆蛋白抽提试剂 CE I。 （对于 200 万 HeLa 细胞， 其细胞沉淀的体积大约为 20µL 或 40mg 。)

3.  最高速剧烈涡旋 5-10 秒，把细胞沉淀完全悬浮并分散开。(如果细胞沉淀没有完全悬浮并 分散开， 可以适当延长涡旋时间 。)

4.  冰浴 10-15 分钟 。 （过程中可适当涡旋 2-3 次）

5.  加入细胞浆蛋白抽提试剂 CE II 10µL 。最高速剧烈涡旋 5 秒， 冰浴 1 分钟。

6.  4 ℃下 12,000-16,000g 转速离心 5 分钟。

7.  立即吸取上清至一预冷的塑料管中， 即为抽提得到的细胞浆蛋白 。可以立即使用， 也可  以冻存。(千万不要触及沉淀，可以在沉淀上方保留极小体积的上清， 以免触及沉淀。每 200

万细胞用 200µL 本产品中的细胞浆蛋白抽提试剂 CE I 裂解后可获得的上清， 其细胞浆蛋白 浓度约为 2-5mg/ml， 不同细胞有所不同 。)

8.  对于沉淀，完全吸尽残余的上清后，加入 50µL 添加了 PMSF 的细胞核蛋白抽提试剂 NE。 (不吸尽上清会带来细胞浆蛋白的污染 。若无法吸尽可使用PBS 重悬高速离心后再吸弃上清  进行裂解操作 。)

9.  将沉淀重悬并在冰上孵育 10 分钟 （过程中可适当涡旋 3-5 次） 。

10.  4 ℃下 12,000-16,000g 转速离心 10 分钟。

12.  立即吸取上清至一预冷的塑料管中， 即为抽提得到的细胞核蛋白 。可以立即使用， 也可 以-80℃冻存。每 200 万细胞用 50µL 本产品中的细胞核蛋白抽提试剂裂解后获得的上清，其

细胞核蛋白浓度约为 1.2-3.0mg/ml， 不同细胞有所不同。

另： 新鲜组织细胞核与细胞质蛋白提取

1     把组织尽可能切成非常细小的碎片 。按照 20:1 的比例混合适当量的细胞浆蛋白抽提试  剂 CE I 和 CE II(例如 200µL 细胞浆蛋白抽提试剂 CE I 中加入 10µL 抽提试剂 CEII)。并加入 PMSF 至最终浓度为 1mM 配制成组织匀浆液 。按照每 60mg 组织加入 200µL 组织匀浆液的 比例混合组织和组织匀浆液(对于不超过 30mg 的组织样品， 仅需加入 100µL 组织匀浆液)， 并在玻璃匀浆器内充分匀浆 。匀浆需在冰浴或 4℃进行。

2     匀浆后把匀浆液转移到塑料离心管内， 冰浴放置 15 分钟。

3    4 ℃条件下 1,500g 离心 5 分钟 。把上清转移至一预冷的塑料管中，为抽提得到的部分细 胞浆蛋白 。(吸上清时千万不要触及沉淀 。)

4    对于沉淀，到了这一步已经充分匀浆，但很多细胞还没有破碎。接下去按照上一个细胞   核质蛋白使用说明的步骤 3 开始操作，即把沉淀当做已经离心收集好的细胞沉淀操作，按照   步骤 3 至步骤 12 抽提得到细胞浆蛋白和细胞核蛋白(特别说明:对于起始量为 30-60mg 的组  织样品， 后续直接按照步骤 3-12 操作即可;对于起始量不超过 30mg 的组织样品， 后续步骤    3-12 中的溶液的用量须减半使用)。抽提得到的细胞浆蛋白可以和步骤 13 中抽提得到的细胞   浆蛋白合并。新鲜的肝脏组织用本产品裂解后获得的上清，其细胞浆蛋白浓度约为 3-10mg/ml， 细胞核蛋白浓度约为 3-10mg/ml， 不同状态的不同组织有所不同。

【注意事项】

1.    PMSF 及蛋白酶抑制剂现配现用， 配好后不能长时间储存。

2 .  尽量减少反复冻融的次数， 以免效率下降。