分子生物学技术服务

本公司为您提供最优质、最专业的分子生物学技术服务，主要包括基因组测序、载体构建、基因表达检测及病毒包装等实验。

基因组测序

实验原理
全基因组重测序，是对基因组序列已知的个体进行基因组测序，并在个体或群体水平上进行差异性分析的方法。与已知序列比对，寻找单核苷酸多态性位点（SNP）、插入缺失位点（InDel，Insertion/Deletion）、结构变异位点（SV，Structure Variation）位点及拷贝数变化(CNV) 。 可以寻找到大量基因差异，实现遗传进化分析及重要性状候选基因的预测。涉及临床医药研究、群体遗传学研究、关联分析、进化分析等众多应用领域。
随着测序成本的大幅度降低以及测序效率的数量级提升，全基因组重测序已经成为研究人类疾病最为快速有效的方法之一。利用illumina 高通量测序平台，将不同插入片段文库和双末端测序相结合，可以高效地挖掘基因序列差异和结构变异等信息，为客户进行疾病研究提供准确依据。

技术应用
该物种基因组序列已知，所测序群体之间遗传性差异不大（>99% 相似度），在已经完成的全基因组测序及其基因功能注释的基础上，采用全基因组鸟枪法（WGS）对DNA 插入片段进行双末端测序。

实验流程

实验结果：

1. 数据产出统计
基因组单碱基深度分布及覆盖度分析。
2. 一致性序列组装
根据与参考基因组序列的比对结果，利用贝叶斯统计模型检测出测序个体基因组中每个碱基位点最大可能性的基因型，并组装出该个体基因组的一致序列。
3.SNP检测及在基因组的分布
在全基因组一致性序列的基础上，从中提取全基因组中所有的潜在多态性位点，再根据质量值、深度、重复性等因素做进一步的过滤筛选，最终得到高可信度的SNP数据集。根据已有的基因集对检测到得变异进行注释。
4.InDel检测及在基因组的分布
使用测序个体的短序列与参考基因组进行Paired-End比对，将比对结果进行聚类分析，并结合Paired-End关系检测可信的short InDel。在检测过程中，gap的长度为1～3个碱基。对于每个InDel的检测，至少需要3个双末端序列的支持。
5.结构变异检测及在基因组中的分布
利用测序个体序列与参考基因组序列进行比对，检测全基因组水平的结构变异，目前能够检测到得结构变异类型主要有缺失、插入、复制、倒位、易位等，并根据已有的基因集对检测到得变异进行注释。

载体构建

实验原理
质粒是存在于细菌染色体外的小型环状DNA分子，具有自我复制功能、带有抗性基因及表型识别等遗传性标记物、经改造后具有多克隆位点，故在由限制性核酸内切酶修饰过的质粒DNA序列中插入外源的目的基因，以质粒为载体，可将外源的目的基因通过转化或转导的方法导入宿主细胞，进行重组、筛选、扩增。

技术应用
主要用于目的基因的表达研究，基因、蛋白的功能研究。

实验流程

实验结果
本公司提供含有目的基因的质粒、菌液及一份使用说明。

基因表达检测

实验原理
荧光定量PCR技术是通过荧光染料或荧光标记的特异性探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时监控反应过程。随着PCR反应的进行，反应产物不断累积，荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环，收集一次荧光强度信号，这样就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化，结合相应的软件分析，可以得到荧光扩增曲线，计算待测样品初始模版的量。实时荧光定量PCR技术是一次由定性技术向定量技术的飞跃，它的出现使得基因表达定量检测更加简便、精确。相对定量是检测基因表达量变化最常用的方法之一。主要用于测定一个待测样本中目标核酸序列与校正样本中同一序列表达的相对变化。可采用SYBR Green I法和TaqMan探针法两种方式，一般采用2^-ΔΔCt法进行计算。

技术应用
本技术主要用于不同药物处理的样本、病理组样本&对照组样本、相同基因在不同组织部位等基因表达差异。

实验流程

实验结果

病毒包装

慢病毒包装

实验原理
慢病毒（Lentiviruses）属于逆转录病毒科。慢病毒核蛋白质前整合复合物具有噬核特性，病毒基因组运输至细胞核，从而使慢病毒可以感染和在非有丝分裂细胞中复制。这一特性使慢病毒成为基因治疗的转移载体。HIV（Human immunodeficiency virus）、EIAV（Equine infectious anemia virus）、FIV （Feline immunodeficiency virus）、 SIV（Simian immunodeficiency virus） 。其中研究最多最为透彻的是HIV。
重组慢病毒的产生：瞬时转染法，即将包装结构和载体结构瞬时共转染法如293T 高表达细胞系而产生重组慢病毒。此法非常成功，大多实验室采用此法。包膜质粒、包装质粒与载体质粒共转染293T细胞直接产生生产细胞。最后重组慢病毒分泌到培养基中进行培养而得到大量载体慢病毒。

技术应用
体外建立稳定表达或沉默目的蛋白的细胞株，体内用于基因的治疗、动物模型的制备等。

实验流程

腺病毒包装

实验原理
腺病毒是一种线性双链DNA病毒，由于其具有宿主范围广、可感染分裂和非分裂细胞、高滴度制备、外源基因装载容量大等优点，重组腺病毒已越来越广泛地被应用于基础研究和临床试验中，并成为世界上最常用的基因治疗载体之一。
重组腺病毒系统是将携带外源基因的腺病毒穿梭质粒与携带腺病毒基因组的包装质粒共转染包装细胞，借助Cre/loxP系统的作用重组产生腺病毒。该系统既克服了传统共转染系统重组效率低的缺点，也避免了细菌重组中的种种不确定性，实现了快速高效的腺病毒包装。
麒盟生物提供的重组腺病毒为复制缺陷型病毒，即病毒感染目的细胞后不会再感染其他细胞，也不会利用宿主细胞产生新的病毒颗粒，安全性能良好

技术应用
腺病毒载体因具有广谱的细胞嗜性、感染效率高、外源基因表达水平高、制备简单、容量大等特点而被广泛应用为哺乳动物细胞表达载体、重组疫苗和基因治疗载体。

实验流程

实验结果