快速过滤法无内毒素中量质粒提取试剂盒（10preps)
产品名称： 快速过滤法无内毒素中量质粒提取试剂盒（10preps)
英文名称： EndoFree plasmid ezFlow ezFilter midi kit
产品编号： PD1422-01
产品价格： 0
产品产地： 美国圣地亚哥
品牌商标： Biomiga
更新时间： null
使用范围： null
Biomiga（中国）
- 联系人 :
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- 邮编 : 201109
- 所在区域 : 上海
- 电话 : 400-826-1968 点击查看
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- 邮箱 : tech@biomiga.com.cn
试剂盒组分：
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Catalog # |
PD1422-01 |
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Preps |
10 |
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EzBindTM Columns |
10 |
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Filter syringe (20 mL) |
10 |
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Buffer A1 |
30 mL |
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Buffer B1 |
30 mL |
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Buffer N3 |
40 mL |
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Buffer KB |
60 mL |
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Buffer RET |
60 mL |
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Endofree Elution Buffer |
15 mL |
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RNase A (20 mg/mL) |
3 mg(150 µL) |
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User Manual |
1 |
保存条件：
RNAse A在4℃下可以保存一年，Buffer A1加入RNase A 后4℃保存，其它组分室温保存。
注意事项：
- 质粒拷贝数：纯化中低拷贝的质粒时，使用2倍的菌液体积，2倍的Buffer A1, B1, N3, RET, 100%乙醇，相同体积的Wash Buffer (70% 乙醇)和EndoFree Elution Buffer.
- 转化菌: 若为-70℃甘油冻存的菌，请先涂布平板培养后，再重新挑选新的单个菌落进行培养。
- 柱结合能力：250 μg
- 对富含内源核酸酶的宿主菌（endA＋）如HB101, JM101, TG1等，需去核酸酶，请使用产品PD1712。
操作简明步骤：
- 取50 µL新鲜的菌液接种到15-50 mL (勿超过 50 mL)的LB培养基（含适量抗生素），37oC震荡培养14-16小时。室温下5,000 x g离心10分钟，收集菌体，并尽可能的吸去上清。
- 加入2.5 mL Buffer A1（确保已加入RNase A），用移液器或涡流震荡确保细菌沉淀重新悬浮。
- 加入 2.5 mL Buffer B1, 轻轻地反转5-10 次以混合均匀，然后静置2-5分钟至溶液粘稠而澄清。
- 加入1 mL Buffer N3, 立即反转5次，用手用力摇晃3-5次充分混匀，此时出现白色絮状沉淀。
- 将裂解液转移至过滤器中，放在一个15 mL的试管上静置10分钟。管中的白色絮状沉淀浮上来，对准15 mL的管向下压，使裂解液尽可能多的通过，有些裂解液可能会残留在沉淀中。注：静至10 分钟时RNase A将工作，排除RNA污染。若离心十分钟后再用过滤器过滤更有利于去除蛋白。
- 向裂解液中加入1倍体积的Buffer RET (即每5 mL裂解液加入5 mL Buffer RET),及3 mL的100% ethonal，用手用力甩5次以混匀，需马上离心过DNA柱。
- 立即转移6 mL裂解液/收集管至带收集管的DNA柱中，室温下5,000 x g离心2分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。重复此步直至所有的溶液通过DNA柱。
- 可选：向离心柱中加入5 mL Buffer KB，室温下5,000 x g 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。
- 向离心柱中加入5 mL 70% 乙醇，室温下5,000 x g 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。重复步骤“9”。
- 将离心柱放回高速离心机中，室温下5,000 x g开盖离心10分钟，以彻底去除残留的乙醇。
- 将离心柱转至一个新的15 mL离心管中，向DNA柱膜的正中加入1 mL的Endofree Elution Buffer, 室温放置1分钟，5,000 x g 离心5分钟，以洗脱质粒DNA。将15 mL离心管中的洗脱液上柱再放置洗脱1分钟，5,000 x g 离心5分钟。 两次洗脱将提高得率。