selleck产品在文献中的引用:

      
    

        

            
Br J Cancer, 2012,   107(10):1702-13
        
        

            
Eur J Pharm Sci, 2013, 49(3):441-50
        
        

            
Oncol Rep, 2013, 29(6):2479-85
        
    

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生物活性
产品描述
Tandutinib (MLN518)是一种有效的FLT3拮抗剂，IC50为0.22 μM，同时也抑制PDGFR和c-Kit，对FLT3作用效果比CSF-1R强15到20倍，比FGFR， EGFR和KDR等强100倍以上。Phase 1/2。
靶点
FLT3
βPDGFR
c-Kit
 
 
 
IC50
0.22 μM
0.20 μM
0.17 μM [1]
 
 
 
体外研究
与Staurosporin不同, Tandutinib有效抑制FLT3,βPDGF 和 c-Kit自磷酸化，IC50为0.17-0.22 μM, 而作用于EGFR, FGFR, KDR, InsR, Src, Abl, PKC, PKA, 和 MAPKs几乎没有效果。Tandutinib抑制不依赖IL-3的细胞生长，也抑制 FLT3-ITD 自磷酸化，IC50为 10-100 nM。Tandutinib 也抑制含FLT3-ITD 突变的人白血病Ba/F3细胞增殖，IC50为10-30 nM, 抑制FLT3-ITD-阳性的Molm-13 和Molm-14细胞时，IC50为 10 nM。Tandutinib 作用于 FLT3-ITD阳性Molm-14细胞而不是FLT3-ITD阴性THP-1细胞,因为特定抑制FLT3，处理24和96小时，分别引起显著凋亡达51%和78%。[1] 与作用于患AML的ITD阴性患者相比，Tandutinib 优先抑制患AML的FLT3 ITD阳性患者体内爆发式集落生长，而不影响正常人祖细胞形成集落。[2]加入低纳摩尔Tandutinib 显著降低Cytarabine 或Daunorubicin的量，而Cytarabine 或 Daunorubicin 是获得抗增殖效果所必需的,说明Tandutinib和Cytarabine/Daunorubicin联用大大增强协同作用。[3]
体内研究
Tandutinib按60 mg/kg剂量口服处理，每天两次，显著提高携带表达W51 FLT3-ITD 突变型Ba/F3细胞的小鼠寿命, 而作用于小鼠骨髓移植模型，显著降低死亡率。[1] Tandutinib按180 mg/kg 剂量每天处理两次，对正常造血功能产生轻微毒性，Tandutinib作用于小鼠，可以有效治疗FLT3 ITD-阳性的白血病。[2]
特征
 
推荐的实验操作(此推荐来自于公开的文献所以Selleck并不保证其有效性)
激酶实验: [1]
基于细胞受体自磷酸化检测
PDGFR 家族激酶的自磷酸化实验是基于细胞的酶联免疫检测实验，使用表达野生型 βPDGFR,嵌合蛋白 βPDGFR/c-Kit,和βPDGFR/Flt3 的CHO 细胞，含有βPDGFR的跨膜结构域及c-Kit,和 Flt-3的胞浆域。细胞在96孔板上汇合，培养在标准组织培养基中,然后血清饥饿处理16小时。使用浓度不断增加的Tandutinib处理静态细胞30分钟，然后加入 8 nM PDGF-BB处理 10分钟。细胞溶解在100 mM Tris, pH 7.5, 750 mM NaCl, 0.5% Triton X-100, 10 mM 焦磷酸钠, 50 mM NaF, 10 μg/mL抑肽酶,10 μg/mL 亮肽素,1 mM 苯甲基磺酰氟, 1 mM 钒酸钠, 在 15,000g转速下离心5分钟，清除裂解液。澄清的裂解液转移到第二个孔板上，孔中事先用500 ng/孔1B5B11 anti-βPDGFR mAb 包被，然后在室温下温育2小时。使用结合buffer (0.3% 明胶, 25 mM HEPES, pH 7.5, 100 mM NaCl,0.01% Tween-20)冲洗三次后, 然后加入250 ng/mL 兔单克隆抗磷酸抗体，实验板在37oC下温育60分钟。随后,每孔使用结合 buffer冲洗三次，再与1 μg/mL 辣根过氧化物酶标记的抗兔抗体在37oC下温育60分钟。孔中冲洗后，加入2,2-联氮-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸),在650 nm处检测底物形成率。
细胞试验: [1]
细胞系
Ba/F3, Molm-13, Molm-14, HL60, AML193, KG-1, KG-1a, THP-1, 和 RS4;11
浓度
溶于DMSO,终浓度为~30 μM
处理时间
~7天
方法
使用浓度不断增高的Tandutinib (0.004-30 μM)处理细胞。细胞在组织培养基中生长3-7 天,使用台酚蓝染色排除法测定细胞，然后计数。收集细胞，冲洗，然后悬浮在100 uL 含10 mM HEPES (pH 7.4), 140 mM NaCl,和2.5 mM CaCl2的结合buffer中，每天一次。在细胞悬液中加入膜联蛋白V-FITC（100 ng）和碘化丙啶(250 ng)，然后在室温下温育15分钟。 在FACSort流式细胞仪上染色后，立刻进行流式细胞仪技术，然后在 488 nm处测定激发光。在515 nm 和585 nm处分别测定膜联蛋白V-FITC 和DNA碘化丙啶染色的荧光值。
动物实验: [1]
动物模型
注射表达W51 FLT3-ITD 突变型的Ba/F3 细胞的雌性无胸腺裸鼠
配制
悬浮在溶于水溶液的0.5% 甲基纤维素(MC)上
剂量
40-120 mg/kg/day
给药处理
口服饲喂
溶解度
0.5% methylcellulose, 30 mg/mL