产品内容：
试剂一：液体 50mL×1 瓶，4℃保存； 
试剂二：液体 35mL×1 瓶，4℃保存； 
试剂三：粉剂×1 瓶（棕色），4℃保存。临用前加入 5mL 双蒸水充分溶解； 
试剂四：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入 5mL 双蒸水充分溶解。
产品说明：
DHAR 存在于线粒体、细胞质和叶绿体中。DHAR 催化 GSH 还原 DHA 生成 AsA，调控细 胞 AsA/DHA 比值，是抗坏血酸-谷胱甘肽氧化还原循环的关键酶。提高植物体内的 DHAR 活性， 可提高植物食品中 AsA 含量，进而提高植物食品的营养品质。 
DHAR 催化 GSH 还原 DHA 生成 AsA， 通过测定 DHA 被还原量可计算得 DHAR 活性。
试验中所需的仪器和试剂：
研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计、1mL 石英比色皿、可调式移液器、蒸馏水。
操作步骤：	
一、粗酶液提取 ：   
按照组织质量（g）：试剂一体积 1：5-10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 试剂一进 行冰浴匀浆。10000rpm，4℃离心 10min，取上清置冰上待测。
 
二、测定操作表：
1. 分光光度计预热 30min，调节波长到 265nm，蒸馏水调零。 
2. 试剂二在 25℃水浴锅中预热 30min 以上。 
3. 空白管：在 1mL 石英比色皿中依次加入 100μL 蒸馏水、100μL 试剂三、100μL 试剂四和 700μL 试剂二，迅速混匀后于 265nm 比色，记录 30s 和 150s 的吸光值 A1 和 A2，△A=A2-A1。 
4. 测定管：在 1mL 石英比色皿中依次加入 100μL 上清液、100μL 试剂三、100μL 试剂四和 700μL 试剂二，迅速混匀后于 265nm 比色，记录 30s 和 150s 的吸光值 A3 和 A4，△A=A4-A3。
三、DHAR活性计算：
（1） 按蛋白浓度计算 
活性单位定义：25℃中每毫克蛋白每分钟还原生成 1μmol AsA 为 1U。 
DHAR (U/mg prot) =[ (△A 测定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×10 6]÷（Cpr×V 样）÷T =0.092×(△A 测定管-△A 空白管) ÷Cpr 
（2） 按样本质量计算 
活性单位定义：25℃中每克样本每分钟还原生成 1μmol AsA 为 1U。 
DHAR (U/g) =[ (△A 测定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×10 6]÷（W×V 样÷V 样总）÷T =0.092×(△A 测定管-△A 空白管) ÷W 
ε: AsA 在 265nm 处摩尔吸光系数，5.42×10 4L/mol/cm；10 6：摩尔分子换算成微摩尔分子；d： 比色皿光径，1cm；V 反总：反应体系总体积，1mL=0.001L；V 样：加入反应体系中上清液体积， 100μL=0.1mL；Cpr：上清液蛋白浓度，mg/ml；T：反应时间，2min。

相关文献：
《Exogenous 24-Epibrassinolide alleviates oxidative damage from copper stress in grape (Vitis vinifera L.) cuttings》 作者:Ya-li Zhou,Su-fang Huo,Li-ting Wang,Jiang-fei Meng,Zhen-wen Zhang,Zhu-mei Xi 期刊:Plant Physiology and Biochemistry 影响因子:3.404 PMID:30099273