慢病毒技术服务

慢病毒（Lentivirus）载体是以HIV-1（人类免疫缺陷1型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。具有感染谱广泛，可以有效感染分裂期和静止期细胞，长期稳定表达外源基因等优点，因此成为导入外源基因的有力工具。现在慢病毒系统已经被广泛应用到各种细胞系的基因过表达、RNA干扰、microRNA研究以及活体动物实验中。

百恩维生物（Biowit）提供的慢病毒：

l 百恩维生物采用第三代 4质粒慢病毒包装系统，生物安全性更高； 

l 采用VSV-G包膜，宿主范围更广； 

l 产生的慢病毒滴度高，可达108~ 1010TU/mL； 

l 各种慢病毒穿梭载体可供选择：过表达、ShRNA、miRNA、Tet诱导表达载体等； 

l 可带有荧光报告基因（GFP、RFP、mCherry、Luciferase等）和药筛标记基因（Puromycin、Neomycin、Hygromycin等），有多种启动子（CMV、PGK、CAG、Ubc等）可供选择； 

l 3~4周内即可完成载体构建以及病毒包装服务。

Biowit各种慢病毒表达载体图谱：（各列举一个载体，如您想了解更多，可以跟我们的技术服务人员联系）

3个包装质粒图谱：

Biowit慢病毒包装技术路

服务流程：

您只需给我们提供详细的基因信息，选定您项目所需的慢病毒载体，我们就能为您生产出符合您要求的带有目的基因的慢病毒。

另外百恩维生物经过鉴定与质量控制：载体测序鉴定、荧光法测定滴度、感染活性测定等，保证给您提供的病毒正确可靠。

Biowit部分慢病毒感染细胞实例：

慢病毒概述

     慢病毒( Lentivirus)属于逆转录病毒科(Retroviridae)，为RNA病毒，如人免疫缺陷病毒(HIV)、猫免疫缺陷病毒(FIV)、猿免疫缺陷病毒(SIV)、牛免疫缺陷病毒等。由于对HIV-1的研究最广泛最深入，对其生物学特性最为了解，因此HIV-1来源的慢病毒载体已成为其中的代表。

    HIV-1为双链RNA病毒，共有9个基因，如图1所示。gag、pol、env3个基因编码病毒的基本结构，tat、rev为调节基因，vif、vpr、vpu、nef 4个为辅助基因。其中，gag基因编码病毒的核心蛋白，包括基质蛋白、衣壳蛋白、核衣壳蛋白；pol基因编码病毒复制所需的酶，如反转录酶、整合酶、蛋白酶，env基因编码病毒的包膜糖蛋白，决定病毒感染宿主的靶向性。rev编码的蛋白调节gag、pol、env的表达水平，tat编码的蛋白参与RNA转录的控制。4个辅助基因编码的蛋白则作为毒力因子参与宿主细胞的识别和感染。两端为长末端重复序列（LTR），内含复制所需的顺式作用元件，如包装信号元件Ψ。

第一代慢病毒载体系统是以三质粒系统为代表，该系统由包装质粒、包膜质粒及载体质粒3种质粒组成。包装质粒是HIV-1前病毒基因组5’端LTR由巨细胞病毒早期启动子取代，3’LTR由SV40 polyA序列取代。包装成分分别构建在两个质粒上，一个表达gag和pol，另一个表达env。载体质粒携带了5’端LTR，和全部5’端非翻译区域，另外还带有rev应答元件（RRE）。包膜表达质粒使用水疱性口炎病毒糖蛋白G基因(VSV-G)用来代替了原病毒的env基因。

第二代慢病毒载体系统是在第一代的基础上进行改进，在包装质粒中删除了HIV的所有辅助基因（vif、vpr、vpu和nef基因）。这些附属基因的去除并不影响病毒的滴度和感染能力，同时增加了载体的安全性。

第三代慢病毒载体系统由四质粒代替原有的三质粒包装系统。将rev基因单独放在一个包装质粒上。同时又增加了两个安全特性：一是构建自身失活的慢病毒载体，即删除了U3区的3′LTR，使载体失去HIV-1增强子及启动子序列，即使存在所有的病毒蛋白也不能转录出RNA；二是去除了tat基因，用异源启动子序列代替，这样原始的HIV-1基因组中的9个慢病毒载体中只保留了3个(gag、pol和rev)。因此第三代慢病毒载体系统更加安全。

百恩维生物用的就是第三代四质粒包装系统，安全可靠。

慢病毒优点

1 宿主范围广  包装病毒时用VSV-G基因代替了原病毒的env基因，宿主范围更广，如神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞。 

2 感染能力强  慢病毒载体对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力，能感染绝大多数细胞，对一些难于转染的细胞，比如神经元细胞、干细胞或其它原代细胞有较好的感染效率。    3 具有整合能力  慢病毒载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达，因此可用于构建稳定表达目的蛋白/RNAi的细胞株，也可以用于制备转基因动物。 

相关技术服务：

稳转细胞株构建

非整合型慢病毒包装

腺病毒包装

腺相关病毒包装

杆状病毒包装