TOP10 感受态细胞 TOP10 Chemically Competent Cell

产品规格: TOP10 10×100μl pUC19（control vector） 10pg/μl 10μl F - mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15Δ lacX74 recA1 araΔ139Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL (StrR) endA1 nupG  TOP10 菌株来源于 MC1061 菌株，是目前实验室最常用的感受态细胞之一，基因型与 DH10B 高度类似（DH10B 为 galE15 型，而 TOP10 为 galU 型）。  TOP10 生长速度快（比 DH5α快，但比 Mach1-T1 生长速度慢），10 小时可见克隆， recA1 和 endA1 的突变有利于插入 DNA 的稳定和高纯度质粒 DNA 的提取。 可用于构建克隆，蓝白斑筛选等实验，具有链霉素抗性。 High5TM系列 TOP10 感受态细胞经 特殊工艺制作，经 pUC19 质粒检测转化效率>108cfu/μg。 1.TOP10 感受态细胞放置冰中融化（或放手心或室温片刻，待菌体处于冰水混合状态时迅速 插入冰中），加入目 的 DNA（质粒或连接产物）并用手拨打 EP 管底轻轻混匀，冰上静置 25 分钟。 2. 42℃水浴热激 45 秒，迅速放回冰上并静置 2 分钟，晃动会降低转化效率。3. 向离心管中加入 700μl 不含抗生素的无菌培养基（2YT 或 LB），混匀后 37℃，200 rpm 复苏 60 分 钟。 4. 5000rpm 离心一分钟收菌，留取 100μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的 2YT 或 LB 培养基上。 5.将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放 37℃培养至少 13h。 1. 感受态细胞最好在冰上融化。 2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。 3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量