产品内容：
提取液：液体100 mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体15 mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存。临用前加蒸馏水1mL充分溶解，4℃保存。
试剂三：液体2 mL×1瓶，4℃保存。
试剂四：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加入试剂一1mL充分溶解，4℃避光保存.
 
产品说明：
AAT是一个多功能蛋白大家族，主要负责催化生物体内各种酰基化和去酰基化反应，在基因表达、代谢和信号传导中具有重要作用。
AAT催化乙酰CoA转移乙酰基到丁醇，同时还原DTNB生成TNB；TNB在412nm有吸收峰，测定412 nm吸光度增加速率，来计算AAT活性。
 
自备仪器和用品：
  可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水
 
 
操作步骤：
一、 样本的前处理：
称取约0.1g样品，加提取液1mL，冰上充分研磨，16000g 4℃离心20min，取上清液待测。
二、 测定步骤：
1、 分光光度计预热30min 以上，调节波长至412nm，蒸馏水调零。
2、 试剂一在37℃水浴保温30 min以上。
3、 样本测定
试剂名称（μL）
空白管
测定管
蒸馏水
20
-
上清液/血清
-
20
试剂一（预热）
140
140
试剂二
10
10
试剂三
20
20
试剂四
10
10
将上述试剂按顺序加入1 mL 玻璃比色皿中，加试剂四的同时开始计时，在412nm 波长下记录10s时的初始吸光度A1 和130s后的吸光值A2，计算ΔA空= A2空-A1空；ΔA测= A2测-A1测，ΔA=ΔA测-ΔA空。
注：如果△A测偏低，可以延长反应时间，如测定10 s和310 s的吸光度，相应修改计算公式中反应时间。
 
三、AAT活性计算：
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下：
（1） 按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：37℃中每mL反应体系下每毫克蛋白每分钟催化吸光值变化0.001个单位为1U。。
AAT (U/mg prot) = 1000×ΔA÷(Cpr×V样) ÷T×（V反总÷1）= 5000×ΔA÷Cpr；
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
（2） 按样本鲜重计算：
单位的定义：37℃中每mL反应体系下每克组织每分钟催化吸光值变化0.001个单位为1U。
AAT (U/g 鲜重) = 1000×ΔA÷(V样÷V样总×W) ÷T×（V反总÷1）=5000×ΔA÷W
（3） 按血清浓度计算：
单位的定义：37℃中每mL反应体系下每mL血清每分钟催化吸光值变化0.001个单位为1U。
AAT (U/mL 血清) = 1000×ΔA÷V血清÷T×（V反总÷1）= 5000×ΔA。
  Cpr：上清液蛋白浓度，mg/mL；V样：加入反应体系中上清液体积，0.02mL；W ：样品质量；V样总：提取液体积，1 mL；T：反应时间，2min；V血清：0.02mL;V 反总：反应总体积，0.2mL；1：每mL反应体系。
b.使用96孔板测定的计算公式如下：
（1）按蛋白浓度计算
   AAT活力单位定义：37℃中每mL反应体系下每毫克蛋白每分钟催化吸光值变化0.0005个单位为1U。
AAT (U/mg prot) = 2000×ΔA÷(Cpr×V样) ÷T×（V反总÷1）= 10000×ΔA÷Cpr
<, p class="MsoNormal" style="line-height: 18pt;">（2）按样本鲜重计算
AAT活力单位定义：37℃中每mL反应体系下每克组织每分钟催化吸光值变化0.0005个单位为1U。
AAT (U/g 鲜重) = 2000×ΔA÷(V样÷V样总×W) ÷T×（V反总÷1）=10000×ΔA÷W
（4） 按血清浓度计算：
单位的定义：37℃中每mL反应体系下每mL血清每分钟催化吸光值变化0.0005个单位为1U。
AAT (U/mL 血清) =2000×ΔA÷V血清÷T×（V反总÷1）=10000×ΔA1。
Cpr：上清液蛋白浓度，mg/mL，蛋白质浓度需要另外测定；V样：加入反应体系中上清液体积，0.02mL； W：样品质量；V样总：提取液体积，1mL；T：反应时间，2min；V血清：0.02mL；V 反总：反应总体积，0.2mL；1：每mL反应体系。
注意事项：
1. 上清液蛋白质含量需要另外测定。建议购买本公司生产的BCA蛋白质含量测定试剂盒。
2. 当吸光值大于1TUNEology 波长可调检测卡盒-->