M-MLV 逆转录酶 ,Rnase H-,点突变-PCR/RT-PCR/qPCR-试剂-生物在线

M-MLV 逆转录酶 ,Rnase H-,点突变

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产品名称： M-MLV 逆转录酶 ,Rnase H-,点突变

英文名称： M-MLV Reverse Transcriptase

产品编号： M10511

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产品产地： Mbchem

品牌商标： Mbchem

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使用范围： null

上海美吉生物医药科技有限公司

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产品详情

M-MLV 逆转录酶 ,Rnase H-,点突变

M-MLV逆转录酶是一种依赖于RNA和DNA的DNA聚合酶。它可以单链RNA、DNA或RNA-DNA杂合链为模板，以RNA或DNA为引物启动DNA合成。

该酶带有针对RNA-DNA杂合链中RNA的RNase H活性。

本产品来源于带有编码莫洛尼氏鼠白血病病毒（M-MLV）逆转录酶的pol基因片段的E.coli菌株。

特点：

· 产量更高，第一链cDNA可达9kb；

· 37℃时活性最高；

· 可用于掺入修饰过的核苷酸(e.g. Cy3-, Cy5-, rhodamine-, aminoallyl-,fluorescein-labeled nucleotides)标准第一链cDNA的合成

使用者需要事先准备：

· dNTP Mix (10mM)

· Nuclease-Free Water

· Primer

· RNA Templete

1. 一个常规的反应需要1ng - 5μg total RNA或1ng - 1μg mRNA，

①RNA变性

按照如下配比将各组分加入到已除酶的微量离心管中：

Oligo(dT)12-18 (10pmol) or 25pmol random

primers or 10 pmole gene-specific primer (GSP) 1 μl

dNTP (10mM) 2 μl

Nuclease-Free Water 11-x μl

RNA (1μg/μl) x μl

65度5min，降温到4度

②上述变性后退火反应液14ul中加入以下：

M-MLV Revertase 5X Reaction Buffer 4 μl

RNase inhibitor (Rnasin) 1 μl

M-MLV Revertase 1 μl

Total 20 μl

2. 混匀各组分并短暂温和离心；

3. （此步使用随机引物时必选）30℃ 温浴10min；

4. 接着42℃ 温浴30-60min；

5. 95℃ 温浴5min终止反应；（长片段77度15min）

6. 4℃ 放置5min。

建议：每50 μl PCR反应容积中，加入2-4 μl 第一链cDNA作为模板。

注意

1. PCR产物>1kb的扩增反应要求去除与cDNA互补的RNA，加入1 μl

(2 units) RNase H，37℃ 温浴20min。

2. 逆转录时添加1M betaine (终浓度) 或 5% DMSO (终浓度)可以增强高GC含量RNA模板的效率。

应用

· 第一链cDNA合成

· RT-PCR和实时RT-PCR

· 用于克隆和表达的cDNA合成

· 被标记的cDNA探针检测基因芯片

· DNA标记

· RNA分析中的引物延伸

活力单位定义

一个单位活力定义为，42℃，以poly(A)-oligo(dT)25作为模板-引物，10min内催化1 nmol脱氧核苷酸[³H]dTTP渗入到酸沉淀物中所需酶量。

质量控制

l 经SDS-PAGE电泳分析，纯度达到95%以上；

l 无DNA内切酶、3’和5’端DNA外切酶及RNA酶的活性。

l 标准反应体系中由RNA ladder（分子量范围从1.2kb到7.5kb）合成cDNA，能够得到单一的全长1.2kb的产物和部分全长7.5kb的产物。

组分	M10511 (10000U)	M10512 (50000U)
M-MLV Revertase	50μl (200U/μl)	250μl (200U/μl)
M-MLV Revertase 5× Reaction Buffer	200μl	1ml
价格	360	1440