免疫共沉淀(Co-IP) 

服务简介：

染色质免疫沉淀技术（ChromatinImmunoprecipitation，简称ChIP）是研究体内蛋白质与DNA相互作用的一种技术。它利用抗原抗体反应的特异性，可以真实地反映体内蛋白因子与基因组DNA结合的状况。特别是近年来由于该技术不断的发展和完善，其应用范围已经从研究目的蛋白与已知靶序列间的相互作用，发展到研究目的蛋白与整个基因组的未知序列的相互作用；从研究一个目的蛋白与DNA的相互作用，发展到研究两个蛋白与DNA共同结合的相互作用；从研究启动子区域的组蛋白的修饰，发展到研究结合在DNA序列上的蛋白复合物。随着对基因功能研究的不断深入，这项技术正越来越多的被应用于科研的各个领域

ChIP-qPCR技术实现了在靶基因的启动子上找到转录因子结合的直接证据，是细胞内真实的、原位的结果，相对于EMSA、luciferase报告载体等体外实验验证更具说服力。

1、服务内容

（1）、温和条件下进行蛋白抽提，BCA定量，调整蛋白浓度

（2）、样品预处理：用Protein A/G Sepharose孵育

（3）、样品与IP抗体进行孵育

（4）、洗涤Protein A/G Sepharose-Antibody-Protein Complex，并对免疫复合物进行变性处理

（5）、沉淀产物SDS—PAGE或者WB鉴定（目前暂无其它鉴定）

（6）、Western blot检测

① 电泳：聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）分离蛋白样品

② 湿法转印（BLOTING：Tank Transfer）

③ 杂交：用抗体鉴定膜上的特定蛋白（INCUBATION: Antibody）

④ 化学发光检测（ECL），胶片曝光，TotalLab Quant软件读取IOD值（可选）

（7）、预实验及正式实验服务

2、样品要求（样品处理及保存见附件）

（1）、细胞＞1×107；组织＞100mg；细菌湿重＞50mg；植物＞100mg；血清＞50ul

（2）、样品蛋白浓度＞1mg/ml，蛋白量＞200ug/样品

3、客户提供材料

(1)、新鲜或正确保存的样品

(2)、目的蛋白一抗

(3)、阳性对照样品（尽量提供）

(4)、相关文献（可选）

4、提交给客户结果

(1)、预实验曝光结果（胶片及扫描图），预实验采取2个一抗稀释度

(2)、正式实验曝光结果（胶片及扫描图）

(3)、完整实验报告

(4)、IOD值分析报告（可选）

5、服务说明

(1)、待检测样品可以是待检测蛋白样品，也可以是细胞、组织等其他样品；

(2)、免疫沉淀用抗体；

(3)、检测用抗体；

6、对照设置

(1)、空白：无抗体，只有protein A/G

(2)、阴性对照：无蛋白，有抗体及protein A/G

(3)、阴性对照：未转染细胞或者基因敲除样品

(4)、无关空白抗体

(5)、蛋白裂解液上清：Input

实验项目及费用