细胞凋亡

    是生物体发育过程中普遍存在的，是一个由基因决定的细胞主动有序的死亡方式。具体指细胞遇到内、外环境因子刺激时，受基因调控启动的自杀保护措施，包括一些分子机制的诱导激活和基因编程，通过这种方式去除体内非必需细胞。而细胞发生程序性死亡时，凋亡的细胞散在于正常组织细胞中，无炎症反应，不遗留瘢痕。死亡的细胞碎片很快被巨噬细胞或邻近细胞清除，不影响其他细胞的正常功能。

    百恩维为您提供以下凋亡检测服务

    1）流式细胞仪检测细胞凋亡——Annexin V/PI 双染色法

    在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧，细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面，这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸（PS）从细胞膜内转移到细胞膜外，使PS暴露在细胞膜外表面。Annexin V是一种Ca+依赖的磷脂结合蛋白，最初发现是一种具有很强的抗凝血特性的血管蛋白，Annexin V具有易于结合到磷脂类如PS的特性，对PS有高度的亲和性。因此，该蛋白可充当敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的PS。但PS转移到细胞膜外不是凋亡所独特的，也可发生在细胞坏死中。两种细胞死亡方式间的差别是在凋亡的初始阶段细胞膜是完好的，而细胞坏死在其早期阶段细胞膜的完整性就破坏了，残废的细胞其细胞膜通透，可被碘化丙啶，一种核酸染料染成红色。如将Annexin V标以荧光素（RPE、FITC等）作为荧光探针，结合PI，利用荧光显微镜或流式细胞检，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。结果示意图如下

2）TUNEL法检测细胞凋亡

TUNEL原理：

细胞凋亡中，染色体DNA双链断裂或单链断裂而产生大量的粘性3’-OH末端，暴露的3'-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)的催化下加上生物素(Biotin)标记的dUTP(Biotin-dUTP)，随后和辣根过氧化物酶(HRP)标记的Streptavidin (Streptavidin-HRP)结合，最后在HRP的催化下通过DAB显色来显示凋亡细胞。而正常的或正在增殖的细胞几乎DNA的断裂，因而没有3’-OH形成，很少能够被染色。TUNEL法是一种高灵敏度又快速简便的细胞凋亡检测方法。对于待检测的细胞或组织样品，经过生物素标记和后续的显色等步骤，即可在普通光学显微镜下观察到凋亡细胞。

下图为TUNEL法检测的染色结果，从而可以判定细胞凋亡情况    

服务流程：

1） 确定实验方案

2） 客户提供固定好的组织、细胞爬片、蜡块或切片

3） 检测凋亡细胞

4） 提供实验结果，包括成像图片，实验报告及原始数据