供应DH5α感受态细胞

保  存：-70℃保存，运输为干冰包装。自收货之日起液氮保存至少一年，-70℃保存至少 6 个月。 

产品简介： 

本公司生产的DH5α感受态细胞是采用大肠杆菌DH5α菌株经特殊工艺制备得到，可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测，转化效率可达 108，-70℃保存 3-5 个月转化效率不发生改变。 

基因型:   supE44△lacU169（φ80 lacZ△M15）hsdR17 recA1 end A1 gyrA96 thi-1 relA1 

特   点:  一种用于铺制与培养质粒平板和粘粒平板的重组缺陷的抑制型菌株。其 φ80 lacZ△M15基因的产物可与 pUC载体编码的  β-半乳糖苷酶氨基端实现 β 互补，可用于蓝白斑筛选。 

操作方法： （以下操作均按无菌条件的标准进行） 

1、将感受态细胞置于冰上融化，以下实验以 100ul 感受态细胞为例。 

2、向感受态细胞悬液中加入需转化的目的 DNA，注意目的 DNA 的体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一，轻轻旋转离心管以混匀内容物，冰浴放置 30 分钟。 

3、将离心管置于 42℃水浴中 60-90 秒，然后快速转移到冰浴中放置 2-3 分钟，注意不要摇动离心管。 

4、向离心管中加入 500ul无菌无抗的 SOC 或 LB 培养基，37℃ 180rpm振荡培养 1 小时。目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。 

5、取适量已转化的感受态细胞涂布含相应抗生素的 SOC 或 LB 平板，37℃倒置培养 12-16 小时。涂布用量可根据具体实验来调整，如转化的 DNA 总量较多，可取 100ul 左右的转化产物涂板；反之，如转化的 DNA总量较少，可取 200-300ul 的转化产物涂板。过多菌液可以抑制细菌生长。如果预计的克隆较少，可通过离心后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。涂布剩余的菌液可 4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新的平板。 

注意事项：  

 1、感受态细胞应保存在-70℃，不可反复冻融，否则其转化效率将会降低。  

 2、实验过程中应严格无菌操作，防止其它 DNA 或杂菌的污染，避免为以后的筛选、鉴定带来影响。  

 3、转化时，转化效率与外源 DNA的浓度在一定范围内成正比，但当加入的外源 DNA量过多或体积过大反而会降低转化效率。转化时 DNA 体积要小于感受态细胞体积的十分之一。  

 4、转化率的计算：转化率＝产生菌落的总数/铺板 DNA总量。  

 5、为防止转化实验不成功，可以保留部分连接产物，以重新转化，将损失降到*低。 

相关产品： 

  I1020  IPTG  溶液 (50mg/ml) 

 A1170   氨苄青霉素储存液(100mg/ml) 

 K1030  Kanamycin (100mg/ml)卡那霉素 

 L1015  LB固体培养基(干粉) 

 L1020  SOC液体培养基(干粉)  

 X1010  X-gal(20mg/ml) 

相关文献：

《Production of l-alanyl-l-glutamine by immobilized Pichia pastoris GS115 expressing α-amino acid ester acyltransferase》 作者:Yi-Min Li, Jiao-Qi Gao, Xu-Ze Pei, Cong Du, Chao Fan, Wen-Jie Yuan and Feng-Wu Bai 期刊:Microbial Cell Factories 影响因子:4.402 PMID:30711013

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