酪蛋白酶谱MMP(3/10) ：

     本方法采用酶谱法(zymography)检测MMP-3/10活性，Zymography是一种基于SDS-PAGE电泳的蛋白酶检测方法，其灵敏度可达1 nM (10~100 pg)，高于ELISA方法。通过制备加有胶原酶底物的SDS-PAGE凝胶，含蛋白酶的样品在凝胶进行电泳，电泳结束后取出凝胶与酶反应Buffer孵育，凝胶进行考马斯亮蓝染色与脱色。凝胶中由于含底物蛋白而被深染，形成深色背景，但在有蛋白酶条带的位置，蛋白酶将降解凝胶中的底物蛋白，因而不被染色而形成透亮区域，从而能同时指示MMP-3/10的大小位置(酶谱)及活性。

样品准备要求：

1）血浆/血清/上清或体液样品准备：血浆或血清样本加入1/10体积的柠檬酸钠，1000rpm离心20分钟，留取上清，以BCA法测定蛋白浓度，测定浓度以后，取约30ug蛋白上样进行电泳检测。样本准备后可暂时4℃保存，不立即测定的样品需-70℃保存，但不宜超过10天。

2）组织样本准备：取100mg新鲜组织以2ml匀浆液进行匀浆（匀浆剂：0.1M Tris/ HCl/pH 7.4 ,0.5% TritonX-100，0.1mg/ml PMSF），12000g 4℃离心5分钟，移取上清层至另一新的1ml离心管待测，取30ug蛋白上样进行电泳检测。样本准备以后，样品可暂时4℃保存，不立即测定的样品需-70℃保存，但不宜超过10天。

3）细胞样本准备：取1个6孔板细胞（每孔细胞量约2×106个细胞），离心后以500ul匀浆液进行超声匀浆（匀浆剂：0.1M Tris/HCl/pH 7.4 ,0.5% TritonX-100，0.1mg/ml PMSF），12000g 4℃离心5分钟，移取上清层至另一新的1ml离心管待测，取30ug蛋白上样进行电泳检测。样本准备以后，样品可暂时4℃保存，不立即测定的样品需-70℃保存，但不宜超过10天。

酶谱电泳图-酪蛋白酶谱