细菌16S扩增检测试剂盒
产品名称： 细菌16S扩增检测试剂盒
英文名称： 细菌16S扩增检测试剂盒
产品编号： PR8801
产品价格： 0
产品产地： 中国
品牌商标： BioTeke
更新时间： null
使用范围： null
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产品描述：
本试剂盒是PCR扩增细菌16S rDNA的试剂盒，通过进一步对PCR扩增的DNA片段进行序列分析，可以鉴定被检测细菌种类。16S rRNA的遗传较为稳定，长度在1550±200 bp左右，代表信息量适中，是研究系统进化的好材料。目前已经报道了10,000种以上的细菌16S rDNA序列。通过对16S rDNA的序列分析，可以将细菌划分到属或种。
16S rDNA可以通过PCR法扩增获得，由于16S rDNA的两端较为保守，可以在这保守区域设计引物，扩增鉴定细菌的16S rRNA基因，然后进行DNA测序，再将其DNA序列与GenBank中的已知序列进行同源性比较后，可以判定检测细菌种类。
本试剂盒中包含了进行细菌16S rDNA PCR扩增的所有试剂，同时还提供了三条测序用引物（正向测序引物Seq forward、反向测序引物Seq reverse、中间测序引物Seq internal）。PCR扩增引物可以扩增全序列的DNA片段（Forward primer/ Reverse primer2），得到较为全面的16S rDNA序列信息。
对于难以培养细菌、生化反应不明显及传统表型方法不能鉴定的细菌，使用本试剂盒鉴定未知细菌种类尤为方便。
产品组成：
PCR Premix* 1 ml ×3支 PCR primers： Forward primer（10 pmol/μl） 100 μl ×1支 Reverse primer（10 pmol/μl） 100 μl ×1支 Seq primers： Seq forward（10 pmol/μl） Seq internal（10 pmol/μl） Seq reverse（10 pmol/μl） 50 μl ×1支 50 μl ×1支 50 μl ×1支 Positive Control DNA（1 ng/μl ） 100 μl ×1支 16S-free H2O 1 ml ×3支
操作方法 1. 模板DNA的提取。 实验用的细菌基因组DNA可以通过传统的苯酚/氯仿抽提法提取，也可以使用本公司生产的细菌基因组DNA提取试剂盒（离心柱）DP2001获得。 对某些细胞壁比较薄的革兰氏阴性细菌，可以使用灭菌牙签挑取单菌落，加入PCR Premix，摇晃牙签使菌落入PCR管中，丢弃牙签。 2. 按下述组份配制PCR反应液。 模板DNA* PCR Premix Forward Primer Reverse Primer2 16S-free H2O 100～200ng 50 2 2 up to 100 约2μl μl μl μl μl 3. PCR反应条件如下。 94℃ 5 min. 94℃ 1 min. 55～57℃ 1 min. 35 Cycles 72℃ 1 min. 72℃ 5 min. 4. 琼脂糖凝胶电泳。 5. PCR产物的回收及DNA测序。 使用切胶回收试剂盒（BioTeke Code：DP1722）回收纯化PCR扩增产物，30-50μl洗脱，然后进行DNA测序， 1.5 kbp的PCR扩增片段可以用Seq forward、Seq internal、Seq reverse引物进行测序。 6. 菌种鉴定。 将DNA测序结果与相应的数据库（NCBI、RDP、EBI等）进行对比，确定菌种种类。 其他说明 1. 实验时应进行阴性对照实验，可以检测PCR反应体系是否有细菌污染。 2. PCR反应用模板以菌体的基因组DNA为佳，对于某些细胞壁比较薄的革兰氏阴性细菌，也可以直接挑取菌落进行16S rDNA的快速检测。 更多产品信息请您发邮件：bioteke8@gmail.com 或者加QQ：2404988600