合成量(起始合成量) 25 nmol, 50 nmol, 0.2 μmol, 1.0 μmol, 10μmol, 15 μmol 最长合成长度 5~130mer 可选纯化方法 Bio-RP, HPLC and PAGE Q.C & Q.A MALDI-TOF Mass Spectrometer & CE (Capillary Electrophoresis) 这里所说合成量指的是起始合成量，终产量根据如下因素所决定。合成的偶联效率分别为99%、98%、97%时，30mer的最终浓度为（0.99）30=74%、（0.98）30=58%、（0.97）30=40%。合成长度越长最终得到的mer数越少。另外根据寡核苷酸序列不同耦合效率也不同，不能合成的极端情况也有可能发生。根据所选择的纯化方式不同最终的产量也会有差异，只做脱盐时，没有偶联的n-1、n-2、n-3…mer长度的寡核苷酸各1-3%长度混合在里面，导致终产量较高。Bioneer的Bio-RP高纯度纯化可以去除所有合成失败、修饰失败、脱盐失败等质量偏差，合成结束后再打MALDI-TOP质谱，得到准确长度的寡核苷酸。 纯化方式 可选择Bio-RP、HPLC、PAGE等多种纯化方式 Bioneer的Bio-RP纯化方式不收取纯化费用 随时为客户提供所需寡核苷酸纯化方面的咨询 Bio-RP纯化 在合成过程中为了防止连续的偶联反应，单体亚磷酰胺核苷的5’羟基基团被DMT基所保护。如果在合成的最后一个cycle结束后不把DMT基拿掉，合成结束后只有n-mer寡核苷酸上有5’DMT基，其他的副产物n-1、n-2、n-3…mer上没有DMT基。DMT基具有疏水性，Bioneer研究团队开发出了Bio-RP纯化方法，RP resin可以和DMT紧密贴合。通过Bio-RP纯化可以有效分离n-mer寡核苷酸，去除n-1、n-2、n-3…mer等副产物，得到高纯度的n-mer寡核苷酸。 HPLC 在做Cloning, Site directed mutagenesis或者Quantitative gene detection等实验时，需要高纯度的寡核苷酸。这时脱盐或者Bio-RP纯化方式满足不了实验要求，为了得到高纯度的寡核苷酸，通常选用HPLC纯化方法。纯化resin通常选用Anion-exchange resin 或者Reversed-phase resin。30mer左右的寡核苷酸用Anion-exchange resin纯化，纯度可以达到90%以上，Reversed-phase resin也能得到类似的纯度。合成长度对HPLC纯化纯度影响很大，所以一般35mer以上不建议用次纯化方式。 PAGE纯化 长链合成通常选用PAGE纯化，Polyacrylamide gel跑电泳一般可以分离到130mer左右的长度，纯度95%以上。电泳方法分离效果虽然很好，但是为了得到寡核苷酸，后续还需要切胶提取再进行脱盐处理，这样会使得率有所损失。 根据应用选择适当的纯化方式 保证量 寡核苷酸的合成终产量根据碱基构成、纯化方法、寡核苷酸长度、起始合成量及修饰不同会差异 Bioneer提供的寡核苷酸量最少不低于标准得率。 Synthesis Scales 最少得量O.D 25mer为基准 Bio-RP PAGE HPLC 0.025 μmole 2 1 1.5 0.05 μmole 4 2 2.5 0.2 μmole 8 6 7 1 μmole 30 18 25 10 μmole 300 33 - 15 μmole 咨询 通过现有的DMT-monitoring QC, PAGE QC, HPLC QC等质检方法，不可能知道失败的合成及修饰成功率。 通过MALDI-TOF QC (Matrix-Assisted Laser Desorption / Ionization Time of Flight) mass spectrometer可以准确的测定分子量，与现有质检方式不同，可以准确的保证合成的质量. 引入7台MALDI- TOF质谱仪，所有合成均通过MALDI-TOF QC从而为客户提供高品质合成。 提供MALDI-TOF QC的数据，方便客户确认寡核苷酸的分子量。 50mer以上的长链合成通过HPCE (High Performance Capillary Electrophoresis) 'Oligo-pro™进行纯度分析。 发货时间 除PAGE纯化以及修饰以外，所有普通合成当天下午3点前提交订单，第二天从韩国发货。货物到上海后发送到客户手中（江浙沪隔天到，其他区域2-3天，根据快递情况可能有延迟情况发生）。