microRNA表达载体构建

MicroRNA（miRNA）是一类真核生物内源性的小分子单链RNA，通常长为18~25nt，能够通过与靶mRNA特异性的碱基配对结合，引起靶序列降解或抑制其翻译，从而对基因进行转录后的表达调控。构建miRNA表达载体，实现microRNAs在细胞中稳定表达，能够弥补瞬时转染持续时间短的不足，miRNA的表达方式通常包括pri-miRNA，pre-miRNA与成熟microRNAs形式。

百恩维生物有多种表达载体，如真核表达载体、各种病毒表达载体等；可选择各种荧光报告基因，如GFP、eGFP、tdTomato、YEP等。

百恩维生物提供以下两种miRNA表达方式：（1）pri-miRNA（初级转入产物）的表达形式；（2）pre-miRNA（miRNA前体）的表达形式。 

客户只需提供miRNA的具体信息及指定过表达载体类型（如慢病毒载体），我们完成序列合成，质粒构建。

技术流程如下：

1、miRNAs序列分析； 

2、PCR引物设计及合成； 

3、PCR扩增pri-miRNA序列或者单链互补引物退火形成pre-miRNA序列； 

4、将片段克隆至含有CMV强启动子的载体上； 

5、测序以确保插入序列正确性； 

6、向客户提交测序结果与实验方法报告单。