DH5α化学感受态细胞

中文名称：DH5α化学感受态细胞
英文名称：DH5α Chemically Competent Cell
产品规格：100μl×10管
本品是采用大肠杆菌DH5α菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。本品使用pUC19质粒检测，转化效率可达108 cfu/μg，广泛适用于高效的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。本品适用于蓝白斑筛选，另对recA1和endA1进行特定的改造使其更能保证克隆DNA的稳定性。

DH5α感受态细胞基因型：F-φ80lacZΔM15 Δ(lacZYA-arg ) U169 endA1 recA1 hsdR17 (rk-, mk+) phoA supE44 λ-thi-1 gyrA96 relA1。

储存条件：-80℃
组份：
DH5α感受态细胞 100μl×10
pUC19(0.1 ng/μl) 5μl

注意事项
1）感受态细胞应保存在-80℃，不可反复冻融和放置时间过长，以免降低感受态细胞的转化效率。
2）整个转化操作，严格根据相应温度及无菌条件要求进行。
3）为确保最高转化效率，整个操作过程应尽量轻柔，并保持低温。
4）为防止转化不成功，可以保留部分连接反应液，以重新转化，最低化实验可能遇到的风险。

使用方法
1）取100 μl感受态细胞置于冰浴中融化。
【注】：一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 μl，可以根据实际情况分装使用，应注意所用的DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。
2）向100 μl感受态细胞悬液中加入目的DNA，轻轻旋转离心管以混匀内容物，在冰浴中静置30min。
3）将离心管置于42℃水浴中放置45s~60s，然后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却2min，该过程不要摇动离心管。
4） 向离心管中加入900μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床振荡培养45 min~60min（150 rpm）， 目的是促使菌体复苏，抗性基因表达。
5）将离心管内容物混匀，吸取100μl已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOB或LB固体琼脂培养基上，用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min，待液体被吸收后，倒置平板，37℃培养12-16 h。
【注】：涂布菌液多少可根据转化DNA量来调整。如果预计的克隆较少，可通过离心后吸除部分培养液，重新悬浮菌体后将其涂布在一个平板上。剩余菌液可置于4℃保存，一周之内可重新涂板。 

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！