Rosetta-gami 2(DE3) Rosetta-gami 2(DE3) Chemically Competent Cell

产品规格: Rosetta-gami 2(DE3) 10×100μl pUC19(control vector) 10pg/μl 10μl D(ara-leu)7697 DlacX74 DphoA PvuII phoR araD139 ahpC galE galK rpsL (DE3) F’[lac+ lacIq pro] gor522::Tn10 trxB pRARE2 (CamR, StrR, TetR) Rosetta-gami 2(DE3) 菌株集合了 Rosetta 2 和 Origami 2 两种菌株的优点： ＊ pRARE2 赋予其 Rosetta2 菌株 的优点——补充大肠杆菌缺乏的 7 种稀有密码子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA 和 CGG)对应的 tRNA，提高外 源基因的表达水平。 -＊ gor522::Tn10 trxB 赋予其 Origami2 菌株的优点——突变的硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase) (trxB)和 谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase) (gor)基因，它们是还原途径的两个关键酶，其突变有利于高效形成正确折叠 的含有二硫键的蛋白，增强蛋白的可溶性；同时该菌株不具有卡那霉素抗性，可用于具有卡那霉素抗性质粒的蛋白表 达＊ 该菌株染色体整合了λ噬菌体 DE3 区 (DE3 区含有 T7 噬菌体 RNA 聚合酶)适合 T7 启动子诱导的蛋白表达。 ＊ -Rosetta-gamiB(DE3)菌株具有氯霉素，链霉素，四环素抗性，由特殊工艺制作，经 pUC19 质粒检测 转化效率高达 108 cfu/μg DNA。 1. Rosetta-gami 2(DE3)菌株感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5 分钟后待菌块融化，加入目的 DNA 并用手 拨打 EP 管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置 25 分钟。 2. 2. 42℃水浴热激 45 秒，迅速放回冰上并静置 2 分钟，晃动会降低转化效率。3. 向离心管中加入 700 μl 不含抗生素的无菌培养基 (2YT 或 LB)，混匀后 37℃，200 rpm 复苏 60 分钟。 4. 5000 rpm 离心一分钟收菌，留取 100 μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含所选质粒筛选抗生素的 2YT 或 LB 培养基上。-