蛋白表达与纯化技术服务 -- 最低3000.00/蛋白，无风险！

步骤1. 目标基因全基因合成：

1. 从基因库中搜索目标蛋白的cDNA序列。
2. 根据选用的表达系统对cDNA进行密码子优化，密码子优化。
3. 合成设计好的基因序列。

提供给客户：目标基因（在T载体或常规穿梭载体上）及测序报告。
价格：3.80元/碱基,如果客户直接提供构建好的质粒，则免去这部分费用．
时间：2~3周，根据基因的大小而定.详见全基因合成服务
步骤2. 目标基因亚克隆：

1. 扩增并抽提含有目标基因的载体质粒。
2. 将目标基因亚克隆到合适的表达质粒上。
3. 测序验证构建质粒的准确性。
4. 闪晶生物免费提供如下表达载体：

提供给客户：正确构建的重组表达质粒，含重组质粒的DH5α菌株及测序报告。
价格：免费　
时间：1-2周
步骤3. E. coli表达菌株转化及筛选：

1. 扩增并抽提构建好的表达质粒。
2. 将表达质粒转化到高效的E.Coli表达菌株中。
3. 至少挑选5个阳性克隆于LB培养基中扩增并诱导表达目标蛋白。
4. SDS-PAGE电泳检测培养后中目标蛋白的表达情况，并挑选合适的单克隆菌株用于目标蛋白的表达。
5. 可提供表达菌株：DH5α, Top10, JM115, BL21 (DE3), BL21 (DE3) pLys, XL1 Blue, XL10 Golden, Rosetta-gami。

提供给客户：重组质粒的表达菌株及表达检测报告。
价格：免费
时间：1周
步骤4. 目标蛋白表达及纯化：

1. 摇瓶培养1L重组细菌，诱导表达目标蛋白。
2. 通过亲和，离子交换，疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白。
3. 利用蛋白酶去除不需要的纯化标签，再纯化获得所需的目标蛋白（可选，构建表达载体时需加入合适的蛋白酶切位点）。
4. 通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制最终产品质量。
5. 通过Western-blot验证目标蛋白正确性。

提供给客户：纯化好的目标蛋白1~5mg及纯化报告。
价格：
1. 如果目标蛋白含有亲和标签（His-tag or GST-tag）
5,000元（目标蛋白纯度>80，不切除标签）
5,500元（目标蛋白纯度>90，不切除标签）
6,000元（目标蛋白纯度>80，切除标签）
6,500元（目标蛋白纯度>90，切除标签）
2. 如果目标蛋白不含有亲和标签
8,000元（目标蛋白纯度>80）
9,000元（目标蛋白纯度>90）
3. 如果没有获得目标蛋白，则不收取任何费用(仅限客户直接提供构建好的质粒时)。

时间：3~4周
备注：
1. 因为每个重组蛋白的表达量及纯化得率都不相同，我们最终根据实际情况将给客户提供最少1mg，最多10mg的目标蛋白，所收取的费用是相同的。
2. 我们提供的最终产品一般为保存于常规的缓冲液（Tris-HCl，PBS或乙酸-乙酸钠缓冲液）中蛋白质溶液，并且其中不含有尿素或盐酸胍等变性剂。
3. 每次Western blot检测最多7个样品，因为要加入阳性对照，阴性对照以及Marker。本步骤只包含一次免费检测，如果需要更多次检测则费用为1500元/次。我们可以免费为客户提供抗His-tag的一抗，如果客户需要使用其他一抗，则需要客户提供。详见 Western Blot 检测服务.

其它相关技术服务
多克隆抗体制备服务
荧光定量PCR检测服务
多肽合成服务
ELISA检测服务
MGB probe
Protein expression
Polyclonal Antibody

上海闪晶分子生物科技有限公司，主要为客户提供全面的生物学服务平台，主要有：
1）基因合成服务：引物设计合成，密码子优化，DNA测序 , TA克隆
2) RNAi 服务，RNAi 载体构建、RNAi 导入优化和干扰评价
3) 蛋白表达与纯化服务，包括哺乳动物、细菌、酵母和病毒表达
4) 多克隆抗体制备和纯化：公司拥有cDNA文库
5) 基因表达分析服务，实时定量PCR ，Western Blot，探针设计合成
6) 克隆服务，包括TA克隆、PCR 克隆和亚克隆、基因突变、载体设计和病毒构建包装等专业服务
7）多肽合成：
8）细胞转染：包括细胞培养，MTT检测，瞬时稳定转染
9） 我公司还出售微型高低离心机，分子生物试剂，实验耗材，广口瓶等。
我们相信自己的经验、技术与能力将能为客户提供更“贴心”的产品与服务，将帮助 科研人员快速、高效获得优质数据，加速生物学、医学类成果的产生与转化。
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