产品名称：FlashPfu DNA 聚合酶

英文名称：FlashPfu DNA Polymerase

产品规格：

产品描述：FlashPfu 高保真DNA 聚合酶通过融合特殊持进能力增强因子与精心改造过的pfu DNA聚合酶，是来源于超嗜热古细菌的DNA聚合酶。该酶具有5→3 聚合酶活力, 3→5 核酸外切酶活力，并产生平头末端产物。由于其具有高效的3→5 核酸外切酶活力（校正活力），使得PCR能获得很好的保真性，FlashPfu DNA聚合酶的错配率约为Taq DNA聚合酶的1/50。FlashPfu DNA聚合酶的最快延伸速率可达5−6 kb/min，对于复杂模板也可达到2 kb/min。

特点与应用：

1、高保真PCR——保真性为Taq DNA聚合酶的50倍

2、快速PCR——延伸速度15−30 s/kb

3、长片段PCR——基因组DNA ≤ 19 kb，λ DNA ≤ 30kb

4、生成用于平头末端克隆的PCR产物

5、定点突变

活力单位定义：75°C、30分钟内使10 nmol的dNTP掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量，定义为1个活性单位（U）。

储存条件：储存于-20℃。

注意事项：

1、请等2× FlashPfu PCR Buffer (with Mg2+)完全溶解后再配制PCR反应体系。

2、为了获得的扩增效果，扩增前的所有操作请在冰上进行。在室温下，聚合酶活力可能会产生非特异性扩增。并且请将FlashPfu DNA Polymerase最后加入反应体系，以避免酶的3’→5’核酸外切酶活力导致引物降解。

3、本产品扩增产物的克隆请按照平头末端克隆方法操作。

4、引物设计：

1）引物Tm值计算请使用最邻近法。请不要使用其他计算方法，它们计算得到的Tm值偏低，不适合本产品。

2）引物长度控制在20−35碱基，并且Tm > 60°C。

3）引物的GC含量尽量控制在40−60%。

4）在引物3’端以G或C结尾，可提高引物和模板结合效率。但是要避免3’端避免有多个G或C，防止非特异性结合。

5）正、反引物的Tm之差不要大于5°C。

6）正、反向引物的3’端避免相互互补。

7）扩增长片段时，引物长度控制在25−35碱基。

8）进行定点突变时，请将错配碱基靠近5’端。若错配碱基靠近3’端，可能会受本酶校正。

不要使用含有尿嘧啶和次黄嘌呤核苷的引物。

应用举例：对于复杂模板的极限延伸速度

步骤1. 按下表所示，在50 μl PCR体系中加入100  ng人基因组：

步骤2. 设置PCR程序：

延伸时间:

X= 1 min (10 s/kb)

1.5 min (15 s/kb)

2 min (20 s/kb)

3 min (30 s/kb)

该案例中所用的引物：

6 kb β-globin target

FP: ACAAGGGCTACTGGTTGCCGATTTT, TATTG

RP: GGGACTGGCCTCAGAGGAAACTTCAGG

案例结果电泳图：

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