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服务说明

TUNEL检测细胞凋亡

      TUNEL是一种经典的细胞凋亡检测方法，凋亡细胞会发生DNA双链断裂，从而在断裂处暴露出3’-OH基团，利用荧光/化学基团标记的dUTP与3’OH基团结合后，可通过荧光成像/染色反应指示凋亡细胞。

技术原理

      细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测，可以发现180-200bp的DNA ladder。基因组DNA断裂时，暴露的3’-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT) 的催化下加上荧光素 (FITC) 标记的dUTP (fluorescein-dUTP) ，从而可以通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测，这就是TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling) 法检测细胞凋亡的原理。

吉凯应用实例

      用待研基因shRNA慢病毒感染A549细胞，TUNEL染色，结果显示，shRNA下调目的基因表达后，凋亡细胞显著增多，表明待研基因与A549细胞凋亡显著相关。

Caspase3/7检测细胞凋亡

    Caspase3/7 的活性是细胞凋亡指示剂，通过检测其活性强弱，判断细胞凋亡情况。

技术原理

       Caspase家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用，其中caspase-3为关键的执行分子，它在凋亡信号传导的许多途径中发挥功能。Caspase-3正常以酶原（32KD）的形式存在于胞浆中，在凋亡的早期阶段，它被激活，活化的Caspase-3由两个大亚基（17KD）和两个小亚基（12KD）组成，裂解相应的胞浆胞核底物，最终导致细胞凋亡。但在细胞凋亡的晚期和死亡细胞，caspase-3的活性明显下降。

吉凯应用实例

       用待研基因shRNA慢病毒感染A549细胞，Caspase3/7活动检测，结果显示，shRNA下调目的基因表达后，Caspase3/7活性显著增强，表明待研基因与A549细胞凋亡显著相关。

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