慢病毒RNAi干扰服务-分子生物学服务 -技术服务-生物在线

产品名称：慢病毒RNAi干扰服务

英文名称：慢病毒RNAi干扰服务

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北京华夏远洋科技有限公司

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慢病毒RNAi干扰服务

质量保证：确保制备的病毒颗粒携带片段的正确性，病毒颗粒的总数和病毒颗粒的滴度达到要求

去除了病毒的关键蛋白，对人体安全；属于复制缺陷型病毒，不会产生下一代病毒颗粒；已被改造为自身失活性，病毒转导并

整合到细胞后不再具有产生具有包装能力的病毒基因组。

稳定整合到细胞基因组，可用于制备多种稳定沉默特定基因的细胞株

原理

慢病毒是逆转录病毒的一种，具有逆转录病毒的基本结构，

但也有不同于逆转录病毒的组份和特性，作为基因治疗载

体发展起来，最近已用于转基因动物制备。利用慢病毒构

建的shRNA/miRNA载体，与化学合成的siRNA和基于瞬时

表达载体构建的shRNA相比，一方面可以替代瞬时表达载

体使用，另一方面，lentivirus－shRNA/miRNA克隆经

过慢病毒包装系统包装后，可用于感染依靠传统转染试

剂难于转染的细胞系如原代细胞、悬浮细胞和处于非分

裂状态的细胞，并且在感染后可以整合到受感染细胞的

基因组，进行长时间的稳定表达。

服务流程

1) 客户提供：表达miRNA/shRNA的质粒（提供测序图谱）或所要Knockdown的靶基因的名称、序列；所需要的病毒滴度及

总量，病毒是否需要纯化；若需要检测靶基因的表达变化，如需要请提供相应的抗体

2) 含目的基因的慢病毒RNAi干扰载体的构建和纯化提取；

3) 慢病毒干扰载体、pGag/Pol、pRev、pVSV-G四质粒共转染293T细胞；

4) 培养48 - 72h，收集培养上清；

5) 病毒的纯化和浓缩（超离和/或超滤）；

6) 滴度测定、目的基因检定

7) 将制得的慢病毒液转导客户的靶细胞，筛选混合稳定细胞株，并检测靶基因的表达

8) 我们提供：提供重组后的慢病毒载体质粒，并附上PCR鉴定结果；提供已测定好滴度、可以直接进行后续分析的慢病毒储存夜