核酸服务

一、核酸的提取与纯化

1、RNA的提取

新鲜组织提取效果最佳，其次为液氮和-70℃及组织RNA保存液中保存的样本，不推荐 使用-20℃及以下温度下保存的样本。

细菌用量：1-2ml ，需要新鲜培养(公司可代为培养，另行收费)。

植物用量：500mg ，需要新鲜植物叶片。

细胞用量： 10 5 -10 6 ，需要新鲜培养(公司可代为培养,另行收费)。

组织用量： 500mg ，需要新鲜标本或冻存在液氮罐中的标本。

血液用量： 5ml ，需要新鲜标本或冻存在液氮罐中的标本。

2、Genomic DNA的提取

新鲜组织提取效果最佳，其次为液氮和-70℃保存的样本，-20℃不宜长期保存样本，否则提取的DNA长度较短。

细菌用量： 10ml收集液，需要新鲜或 -20 ℃保存标本。

植物用量：叶片100mg，需要新鲜或 -20 ℃保存标本。

细胞用量： 10 5 -10 6，需要新鲜或 -20 ℃保存标本。

组织用量： 25mg ，需要新鲜或 -20 ℃保存标本。

血液用量： 5ml ，需要新鲜标本或冻存在液氮罐中的标本。

酵母用量：10 5 -10 6 或10ml液体培养物，需要新鲜或 -20 ℃保存标本。

3、质粒 DNA 的小量 / 中量 / 大量提取

高拷贝质粒： 10ml 菌液， 25-50 μ g

低拷贝质粒： 20ml 菌液， 15-30 μ g

高拷贝质粒： 100-200ml 菌液， 500-1000 μ g

低拷贝质粒： 100-200ml 菌液， 500-800 μ g

10ml 菌液， 25-50 μ g

二、PCR及RT-PCR

1、PCR扩增条件的优化

客户提供模板(可代提取)和引物(可代合成)

2、常规PCR实验

客户提供模板(可代提取)和引物(可代合成)

客户提供模板(可代提取)和引物(可代合成)

客户提供模板(可代提取)和引物(可代合成)

3、引物的设计与合成

采用两套以上的软件设计，保证引物的可靠性。请用户提供相应

的模板序列，通过 Email 传送。

OPC ，PAGE，HPLC纯化

4、RNA 的反转录及 PCR 扩增

由用户提供新鲜制备的模板(可代提取)

由用户提供引物(可代合成)

三、荧光定量PCR
 

服务项目：

常规定性分析：

通过终点法分析样本中把序列的阴性/阳性，在终点读板鉴定的同时对扩增过程进行全程跟踪，可及时发现样本污

染、假阳性、“弱阳性”等情况，是目前病原体检测等临床应用的最佳选择。同时也是科学研究领域的重要应用技术。

相对定量：

通过对不同样本靶基因的表达或含量进行检测，可以判断不同样本间靶基因表达的相对高低，是对不同样本相

同靶基因表达情况的“比较”。

绝对定量：

合成一个和某靶基因具有相同序列的片段(或构建载体)作为标准品，通过测量OD值便可以计算出标准品的摩

尔浓度，不同浓度的标准品在相同体系(即相同扩增效率)下对应的ct值具有高度的唯一性和良好的重复性，可以

作为该基因的“标尺”。通过对未知样本中该靶基因ct值的检测，便可由“标尺”测算出未知样本中靶基因的摩尔

浓度。达到精确定量的目的。

HRM分析：

高分辨率溶解曲线是一种检测基因突变、进行基因分型和SNP检测的新工具，可以迅速的检测出不同样本中单

个碱基的差异。HRM 检测技术操作简便，速度快，高通量，灵敏性好，特异性高，同时对试剂、仪器、软件及经验

技术也提出了较高的要求。

检测方法：

Sybr Green I 染料法：成本较低，并且可以通过溶解曲线发现非特异性扩增。

taqman 探针法：比染料法具有更高的特异性，但成本也相对较高。

其他：除以上两种常用方法，我公司ROCHE 480 II还可以满足Molecular beacon、LUX等其他多种方法的检测。