产品内容： 
提取液：液体100mL×1 瓶，4℃保存。 
试剂一：液体6mL×1 瓶，4℃保存。 
试剂二：液体2mL×1 瓶，4℃避光保存。 
试剂三：液体1mL×1 支，4℃避光保存。 
试剂四：液体1mL×1 支，4℃保存。 
试剂五：液体1mL×1 支，4℃保存
产品说明： 
乙醛脱氢酶 (EC 1.2.1.10)是醛脱氢酶的一种，广泛存在于各种动物、植物和微生物体内。主要 作用是将乙醛氧化成乙酸，在酒精代谢中起主要作用。在人类和许多动物体内，线粒体乙醛脱氢酶 能把对生物体有害的醇类转化，所以在细胞解毒研究中乙醛脱氢酶受到高度关注；同时，乙醛脱氢 酶在分子生物学以及相关疾病的检测方面有较广泛的研究应用。 在辅酶Ⅰ存在的条件下，乙醛脱氢酶催化乙醛和NAD+转化为乙酸和NADH，在340nm 处的吸 光值会增加，测定340nm 处的吸光值变化，可计算得到乙醛脱氢酶的活性。 
自备实验用品及仪器： 天平、离心机、恒温水浴锅、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔UV板、蒸馏水。
 
操作步骤： 
ALDH 提取： 
1. 组织：
按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为 1：5-10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。12000rpm， 4℃离心 20 分钟。 
2. 细胞：
按照细胞数量（10 4个）：提取液体积（mL）为 500-1000:1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细菌或细胞（功率 30%或 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒。总时间 3min）；10000rpm, 4℃离心 10 分钟，取上清，置冰上待测。 
 
测定操作
 
 
对照管
测定管
样本(μL)
 
40
试剂一(μL)
60
60
试剂二(μL)
20
20
试剂三(μL)
10
10
试剂四(μL)
10
10
试剂五(μL
10
10
H2O(μL)
90
50
充分混匀，1mL 石英比色皿，对照管调零，于340nm 处测定吸光值A1，迅速置于37℃水浴1min， 于340nm 处测定吸光值A2，△A= A1-A2。
ALDH 酶活计算 
a． 用微量石英比色皿测定的计算公式如下 
（1） 按蛋白浓度计算 
酶活定义：每毫克蛋白每分钟催化还原1nmol NAD+的酶量为 1U。 
ALDH 酶活（U/mg prot）=△A÷(ɛ× d) ×V反总÷（V样×Cpr）÷T=804×△A÷Cpr 
（2） 按样本质量计算 
酶活定义：每克样品每分钟催化还原1nmol NAD+的酶量为 1U。 
ALDH 酶活（U/g）=△A÷(ɛ× d) ×V反总÷（V样×W÷V样总）÷T=804×△A÷W 
（3） 按照细胞数量计算 
酶活定义：每10 4个细胞每分钟催化还原1μmol NAD+的酶量为 1U。
ALDH 酶活（U/10 4 cell）=△A÷(ɛ× d) ×V反总÷（V样÷V样总×细胞数量（万个））÷T =804×△A÷细胞数量（万个） 
（4）按液体体积计算 
酶活定义：每毫升液体每分钟催化还原1nmol NAD+的酶量为1U。 
ALDH 酶活（U/mL）=△A÷(ɛ× d) ×V反总÷V样÷T=804×△A 
ɛ ：NADH 微摩尔消光系数，6.22×10 -3 L/μmol /cm；d：比色皿光径，1cm；V 反总：反应体 系总体积，0.2mL；V 样：反应体系中样本体积，0.04mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；Cpr： 样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间：1min。 
 
b．用 96 孔板测定的计算公式如下 
（1）按蛋白浓度计算 
酶活定义：每毫克蛋白每分钟催化还原 1nmol NAD+的酶量为 1U。 
ALDH 酶活（U/mg prot）=△A÷(ɛ× d) ×V反总÷（V样×Cpr）÷T=1608×△A÷Cpr 
（2） 按样本质量计算 
酶活定义：每克样品每分钟催化还原1nmol NAD+的酶量为 1U。 
ALDH 酶活（U/g）=△A÷(ɛ× d) ×V反总÷（V样×W÷V样总）÷T=1608×△A÷W 
（3） 按照细胞数量计算 
酶活定义：每10 4个细胞每分钟催化还原1μmol NAD+的酶量为 1U。
ALDH 酶活（U/10 4 cell）=△A÷(ɛ× d) ×V反总÷（V样÷V样总×细胞数量（万个））÷T =1608×△A÷细胞数量（万个） 
（4）按液体体积计算 
酶活定义：每毫升液体每分钟催化还原1nmol NAD+的酶量为1U。 
ALDH 酶活（U/mL）=△A÷(ɛ× d) ×V反总÷V样÷T=1608×△A 
ɛ ：NADH 微摩尔消光系数，6.22×10 -3 L/μmol /cm；d：96 孔板光径，0.5cm；V 反总：反应 体系总体积，0.2mL；V 样：反应体系中样本体积，0.04mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；Cpr： 样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间：1min。
 
相关文献：
《Untangling the response of bone tumor cells and bone forming cells to matrix stiffness and adhesion ligand density by means of hydrogels》 作者:Tongmeng Jiang,Jinmin Zhao,Shan Yud,Zhengwei Mao,Changyou Gao,Ye Zhu,Chuanbin Mao,Li Zheng 期刊:Biomaterials 影响因子:10.273 PMID:30343256
《Efficient metabolic evolution of engineered Yarrowia lipolytica for succinic acid production using a glucose-based medium in an in situ fibrous bioreactor under low-pH condition》 作者:Chong Li, Shi Gao, Xiaotong Li, Xiaofeng Yang & Carol Sze Ki Lin  期刊:Biotechnology for Biofuels 影响因子:5.452 PMID: