Glutathione Sepharose 4FF 预装柱说明书
货号：YA2431
规格：1*1mL / 1*5mL / 5*1mL / 3*1mL+1*5mL / 5*5mL
保存：2-8℃
产品说明：
    Glutathione Sepharose 4FF 可以一步纯化各种表达系统表达的谷胱甘肽-S-转移酶、谷胱甘肽依赖
性蛋白和谷胱甘肽转移酶的重组衍生物。Glutathione Sepharose 4FF 是以高度交联的 4%琼脂糖凝胶
为基质，通过 12 个原子的间隔臂，用化学方法共价结合了还原型谷胱甘肽制作而成。Glutathione
Sepharose 4FF 因其耐压的基质，可以在相对较高的流速下，实现对目的蛋白的纯化，更适合用于工
业大规模蛋白的纯化。
表 1：介质性能参数



纯化流程：
1、Buffer 的准备
所用水和缓冲液在使用之前建议用 0.22μm 或 0.45 μm 滤膜过滤。
平衡/洗杂液: 140 mM NaCl，2.7 mM KCl，10 mM Na2HPO4，1.8 mM KH2PO4，pH 7.4
洗脱液: 50 mM Tris-HCl，10 mM 还原型谷胱甘肽，pH 8.0
注意: 平衡液和洗脱液中可加入 1–10 mM DTT。
2、样品准备
样品在上样前建议离心或用 0.22μm 或 0.45μm 滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止
堵塞柱子。
3、样品纯化
1. 上柱：将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子，将层析柱连接至色谱系统中。再折断下口，
将预装柱接到色谱系统中，并旋紧。
2. 水洗：用 3-5 倍柱体积的去离子水冲洗出存储缓冲液。
3. 平衡：使用至少 5 倍柱床体积的平衡液平衡色谱柱。
4. 利用泵或注射器上样。
注:样品的粘度增加使得即使上样体积很少，也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子
的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压，使得进样器更难使用。
5. 洗杂：用洗杂液冲洗柱子，直到紫外吸收达到一个稳定的基线（一般至少 10-15 个柱体积）。

6. 洗脱：使用 5-10 倍柱体积的洗脱液洗脱，收集洗脱液，即目的蛋白组分。
7. 水洗：依次使用 3 倍柱体积的平衡液和 5 倍柱体积的去离子水平衡填料，最后再用 5 倍柱体
积的 20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的 20%的乙醇中，置于 4℃保存，防止填料被细菌污染。
4、SDS-PAGE 检测
将纯化过程中收集的样品（包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分）以及原始样品使用 SDS-PAGE
检测纯化效果。
填料清洗
GST 标签蛋白纯化产品可以重复使用而无需再生，但随着非特异性结合的蛋白的增多和蛋 白的
聚集，往往造成流速和结合载量性能下降，这时需要对树脂进行清洗。
去除一些沉淀或变性物质，建议使用下面的方法
用 2 倍柱体积的 6M 盐酸胍溶液进行清洗，然后立即用 5 倍柱体积的 PBS，pH 7.4 清洗。
去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质
用3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积的1% Triton X-100 清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS，
pH 7.4 清洗。