MitoLite 线粒体绿色荧光探针是一种阳离子染料，可以通过线粒体膜电位梯度选择性

地积聚在线粒体中。线粒体指示剂是一种疏水性化合物，很容易透过完整的活细胞，并在进入细胞后被线粒体捕获。这种荧光线粒体指示剂长时间保留在线粒体中，因为该指示剂带有细胞保留基团。这一关键特性显着提高了染色效率。它可以很容易地适用于各种荧光平台，如微孔板分析，免疫细胞化学和流式细胞术。它适用于增殖和非增殖细胞，可用于悬浮细胞和贴壁细胞。MitoLite 线粒体绿色荧光探针是AAT Bioquest研发的产品。

 产品光谱图


产品说明书

MitoLite 染料的分析方案

概述

准备细胞

添加染料工作溶液

在37°C孵育30分钟至2小时

清洗细胞

在荧光显微镜下分析

操作步骤

1.准备线粒体染色溶液：

1.1解冻MitoLite 染料至室温。

1.2通过将20μL500X Mitolite 染料稀释到10 mL Hanks和20 mm Hepes缓冲液或缓冲液（HBSS

）中，制备染料工作溶液。

注1：20μLMitolite 染料足以用于一个96孔板。 在<-15℃下分装并储存未使用的MitoLite

染料储备溶液。 保护它免受光照，避免反复冻融循环。

注2：荧光线粒体指示剂的最佳浓度根据具体应用而变化。 可以根据特定细胞类型和细胞或组

织对探针的渗透性来修改染色条件。

2.准备和染色细胞：

2.1对于贴壁细胞：a.在96孔黑色壁/透明底板（100μL/孔/ 96孔板）中或在装有适当培养基

的培养皿内的盖玻片上培养细胞。当细胞达到所需的汇合时，加入等体积的染料工作溶液（

来自步骤1.2）。 b.将细胞在37oC，5％CO₂培养箱中孵育30分钟至2小时。 c.用预热（37oC）

Hanks和20 mM Hepes缓冲液（HBSS）或您选择的缓冲液（例如浓度为1：1的生长培养基缓冲液

）替换染料加载溶液或清洗（特别是对于＃22679）细胞。用HBSS或生长培养基填充细胞孔。

d.使用配有所需滤光片组的荧光显微镜观察细胞。

注意：如果细胞看起来没有充分染色，建议增加标记浓度或孵育时间以使染料积累。

2.2对于悬浮细胞：将细胞以1000rpm离心5分钟以获得细胞沉淀并吸出上清液。在预热（37℃

）生长培养基中轻轻重悬细胞沉淀，并?入等体积的染料加工溶液（来自步骤1.2）。将细胞

在37℃，5％CO₂培养箱中孵育30分钟至2小时。用Hanks和20mM Hepes缓冲液（HH缓冲液）或缓

冲液替换染料加载溶液或洗涤（特别是对于＃22679）。（例如生长培养基浓度为1：1的缓冲

液）。用HBSS或生长培养基填充细胞孔。使用配有所需滤光片组的荧光显微镜观察细胞。

注1：如果细胞看起来没有充分染色，建议增加标记浓度或培养时间以使染料积累。

注2：悬浮细胞可以附着在用BD Cell-Tak®（BD Biosciences）处理过的盖玻片上，并作为粘

附细胞染色（见步骤2.1）。