漆酶测定试剂盒
产品名称: 漆酶测定试剂盒
英文名称: Laccase Assay Kit
产品编号: BC1630
产品价格: 0
产品产地: 北京市通州区马驹桥联东U谷85A三
品牌商标: Solarbio
更新时间: 2024-11-15T08:48:53
使用范围: null
- 联系人 : 索莱宝-龚思雨
- 地址 : 北京市通州区中关村科技园区通州园金桥科技产业基地景盛南四街15号85A三层
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产品内容:
提取液:液体50mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体30mL×1 瓶,4℃保存。
工作液:粉剂×2 瓶,4℃避光保存,临用前加15mL 试剂一溶解。
产品说明:
漆酶(CE1.10.3.2)是一种含铜的多酚氧化酶,属于铜蓝氧化酶家族,广泛分布于真菌和高
等植物中,具有较强的氧化还原能力,在纸浆生物漂白,环境污染物降解和木质纤维素降解
以及生物检测方面有非常广泛的应用。
漆酶分解产物ABTS 产生ABTS自由基,在420nm 处的吸光系数远大于底物ABTS,测定
ABTS 自由基的增长速率,可计算得漆酶的活性。
自备实验用品及仪器
天平、低温离心机、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、恒温水浴锅。
操作步骤:
一、 酶液提取
1、 细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(ml)为500-1000:1 的比例(建议500万细胞加入1ml提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率30%或300W,超声3s,间隔7s,总时间3min),12000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2、 组织:按照组织质量(g):提取液体积(ml)为1:5-10 的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml提取液),进行冰浴匀浆;10000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
3、 培养液:直接待检。
二、 测定操作表
对照管
测定管
样本(mL)
0.1
煮沸样本(mL)
0.1
工作液(mL)
0.6
0.6
60℃,3min,测定420nm 处吸光值A,△A=A 测定管-A 对照管
三、 酶活性计算公式:
1. 按照蛋白浓度计算
酶活性定义:每毫克蛋白每分钟氧化1nmol 底物ABTS 所需的酶量为一个酶活力单位(U)
漆酶活性(U/mg prot)=△A÷(ε×d) ×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T= 65×△A÷Cpr
2. 按照样本质量计算
酶活性定义:每克样品每分钟氧化1nmol 底物ABTS 所需的酶量为一个酶活力单位(U)
漆酶活性(U/g)=△A÷(ε×d) ×V 反总÷(V 样×W)÷T= 65×△A÷W
3. 按照细胞数量计算
酶活性定义:每104个细胞每分钟氧化1nmol 底物ABTS 所需的酶量为一个酶活力单位(U)
漆酶活性(U/104 cell)=△A÷(ε×d) ×V 反总÷(V 样×细胞数量÷V样总)÷T= 65×△A÷细胞数量
4. 按照液体体积计算
酶活性定义:每104个细胞每分钟氧化1nmol 底物ABTS 所需的酶量为一个酶活力单位(U)
漆酶活性(U/L)=△A÷(ε×d) ×V 反总÷V 样÷T= 65000×△A
ε:ABTS 毫摩尔消光系数;36L/mmol/cm;d:比色皿光径,1cm;V反总:反应总体积,0.7mL;V样:反应中样本体积,0.1mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W,样本质量,g;T:反应时间,3min
注意事项:
1. 工作液需临用前配制,并且尽快使用,4℃保存一周,若变色则不能使用。
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