小鼠毒蕈碱型乙酰胆碱受体亚型M2 ELISA北京检测/小鼠M-AChRM2 ELISA试剂盒说明书

底物配制方法如下：
1、用O.P.D作底物：先配制PH5.0柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液。取0.1 mol/L（19.2克/升），柠檬酸溶液24.3ml，加0.2 mol/L（27.4克/升）Na2HPO溶液25.7ml，再加蒸馏水50ml，然后将40mgO.P.D溶解其中，再加30% H2O2 0.10ml即可应用，用时新鲜配制、避光。
2、用OT作底物，先配PH3.7的醋酸盐缓冲液，取0.2M醋酸（12ml/升）和醋酸钠（16.4克/升）溶液等量混和，然后称取OT 21.2mg先溶于1ml二甲基乙酰胺中，再将OT溶液倾入100ml PH3.7的醋酸盐缓冲液中，并加入30%H2O2 0.05ml即得，用前新鲜配制。

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对HRP酶结合物来说，主要通过酶的催化作用使过氧化氢还原。同时使另一个底物氧化产生色变，可供选择的底物有几种，过去都用5-氨基水杨酸，它经酶催化后产生棕色产物便于观察，缺点是容易产生沉淀，用于定量测定时有困难。目前大多数使用邻苯二胺（Ortho-Pheny lene-diamine，简称OPD），稳定、敏感，其降解产物呈桔红色，可溶。用2 mol/L H2SO4或柠檬酸终止反应，可在492nm波长的酶标比色计上测定O.D值，也可目测。

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