慢病毒载体构建包装与转染：

慢病毒（Lentivirus）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷1型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。具有感染谱广泛，可以有效感染分裂期和静止期细胞，长期稳定表达外源基因等优点，因此成为导入外源基因的有力工具。现在慢病毒系统已经被广泛应用到各种细胞系的基因过表达，RNA干扰，microRNA研究以及活体动物实验中。慢病毒中的毒性基因已经被外源基因锁取代，属于假性病毒。

开阳生物提供慢病毒载体构建，RNAi(shRNA)，miRNA，过表达（cDNA）慢病毒包装以及基于慢病毒技术的稳定细胞系，慢性病毒表达载体技术包含了构建、包装、转染等步骤，将外源性基因克隆进入表达载体，与包装质粒一起转染细胞。慢病毒系统可以转染多种细胞类型如原代细胞、干细胞、非分裂细胞等，实现可重复的稳定表达。对于一些较难转染的细胞，慢病毒系统采用病毒包装外源基因方式进入细胞并稳定表达，是一种理想的基因表达工具。慢病毒通过顺式作用元件将病毒运送入细胞核，将所要表达的基因序列重组整合到细胞的基因组中，从而实现目的序列持续稳定的高表达。

服务项目

1.shRNA基因干扰慢病毒构建、包装与细胞转染、后续检测服务 

重组腺病毒载体构建服务，指定载体中插入shRNA片断达到沉默或降低目的基因mRNA表达的效果；同时可以根据客户的需要，可在重组慢/腺病毒载体中加入各种报告基因或标签；并可构建可调控表达的重组腺病毒载体。

重组慢/腺病毒扩增及纯化，大量高滴度的扩增及纯化病毒，纯化后可以达到2×10⁸ -2×10⁹ pfu/ml（慢病毒），体积在1-2ml左右，可以满足细胞水平研究所需病毒量和满足瘤内注射需要量不同规格病毒扩增。

附  RNA干扰慢病毒载体构建套餐

服务周期：3周

服务内容：根据客户指定的基因序列设计3个RNA干扰靶点，构建到慢病毒RNA干扰载体上。我们保证在转染效率大约90%的条件下，至少有1个靶序列的干扰效率大于70%。

注：客户需基因编号或基因序列。

2.miRNA慢病毒构建、包装与细胞转染、后续检测服务

2-1）过表达miRNA慢病毒服务

将成熟miRNA、pre-miRNA或者pri-miRNA构建到慢病毒过表达载体中，其中pri-miRNA（含侧翼序列）的方式由于保留了每个microRNA独自的原始天然双臂结构，效果更佳。

2-2）抑制miRNA慢病毒服务

miRNA抑制剂(miRNA inhibitor)表达后则高效、特异地结合细胞内成熟的靶miRNA，形成稳定的复合物，阻止了miRNA对靶标mRNA的降解或者翻译抑制。

3.过表达（cDNA）慢病毒构建、包装与细胞转染、后续检测服务

客户只需提供目标基因的GeneBank编号，开阳生物采用基因合成或基因克隆的方法获得全长CDS序列（需收取费用），克隆到适当的慢病毒载体中，对克隆序列全长进行测序确保序列正确无误。客户也可以提供已克隆目标基因序列的载体，由我们将目标基因克隆到慢病毒载体并进行扩增、纯化和细胞转染等后续服务。慢病毒颗粒纯化后可以达到2×10⁸ -2×10⁹ pfu/ml（慢病毒），体积在1-2ml左右。

慢病毒服务方最终提供：

服务方提供：载体质粒（20ug）和菌液(200ul)、慢病毒颗粒（1ml 病毒颗粒，2×10⁸ pfu/ml），：电泳图谱，测序图谱、实验报告

供货周期：50工作日起

运输说明：干冰冻存病毒快递寄送

保存方式：-80℃冰箱或液氮冻存，融化后短时间4℃保存，避免反复冻融

慢病毒转染(白光)                                       慢病毒转染(荧光)