Rosetta-gami(DE3)pLysS 感受态细胞 Rosetta-gami(DE3)pLysS Chemically Competent Cell

产品规格: Rosetta-gami(DE3)pLysS 10×100μl pUC19（control vector） 10pg/μl 10μl Δ(ara-leu)7697ΔlacX74phoAPvuIIphoRaraD139ahpCgalEgalKrpsL(DE3)F[lac+ lacIqpro]gor522 ::Tn10 trxB pLysSRARE2 (CamR , StrR , TetR )  High5TM系列 Rosetta-gami(DE3)pLysS 菌株聚合了不同原核表达菌株的优势： ＊ Rosetta-gami 赋予其 Rosetta 和 Origami 的优点——补充大肠杆菌缺乏的 6 种稀有密码子 (AUA， AGG， AGA， CUA，CCC， GGA) 对应的 tRNA，提高外源基因的表达水平，并且包含突变 的硫氧还蛋白还原酶（thioredoxin reductase）(trxB) 和谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase)(gor)基 因，表达主要还原途径的两个关键酶。有利于形成正确折叠的含有二硫键的蛋白，增强蛋白的可溶性。 ＊ 该菌株染色体整合了λ噬菌体 DE3 区（DE3 区含有 T7 噬菌体 RNA 聚合酶），适合 T7 启动子诱导的 蛋白表达。 ＊ 该菌株携带的 pLysS 质粒含有表达 T7 溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰 IPTG 诱导的表达，适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。Rosetta-gami(DE3)pLysS 菌株具有卡那霉素，氯 霉素，链霉素，四环素抗性，经 pUC19 质粒检测转化效率高达 108cfu/μg。1. 取 100μl 冰上融化的 Rosetta-gami(DE3)pLysS 感受态细胞，加入目的质粒并轻轻混匀， 冰上静置 25 分钟。 2. 42 回冰上并静置 2 分钟，晃动会降低转化效率。 3. 向离心管中加入 700μl 不含抗生素的无菌培养基（2YT 或 LB），混匀后 37℃，200rpm 复苏 60 分 钟。 4. 5000rpm 离心一分钟收菌，留取 100μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的 2YT 或 LB 培养基上。 5. 将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养。 1. 感受态细胞最好在冰上融化。 2. 混入质粒时应轻柔操作。 3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。 4. 诱导时，IPTG 浓度可选（0.1-2mM 均可）。 5. 为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG 浓度需实验者优化。 6.BL21(DE3)pLysS 菌株携带 pLysS 质粒，除复苏培养基为无抗生素外，其余所用培养基、培养液均应 含有 34 µg/ml 氯霉素，以防质粒丢失。7. 具有卡那霉素抗性，不能用于具有卡那霉素抗性质粒的表达。