基因型鉴定是很多分子生物学研究的必经步骤。然而,传统的基因鉴定流程十分繁琐:从小鼠解剖、组织分离,到DNA提取、纯化,再到PCR扩增和电泳分析——整个过程耗时耗力,甚至需要一整天才能完成。其中,核酸提取步骤还可能因操作不当导致样本损失或污染。
由此,直接PCR(Direct PCR)技术应运而生。它无需DNA提取纯化,可直接利用原始样本(如动物组织、血液、植物叶片等)进行PCR扩增,最大限度简化实验流程,让基因检测更快速、更简单、更轻松!
什么是直接PCR?
直接PCR是一种特殊的PCR技术,其核心在于采用高耐受性的聚合酶,能够抵抗样本中的抑制物(如蛋白质、多糖等),即使面对未经纯化的粗样本,也能高效扩增目标基因。
直接PCR摒弃了传统PCR耗时的提取流程,缩短实验时间,并降低了在提取过程中可能引入的污染风险。
图1. 直扩PCR与传统PCR技术比对图
Arcegen直接PCR试剂盒——让实验更轻松
针对不同样本类型(动物组织、植物、血液等)优化,稳定、高效扩增:
♦ 无需核酸纯化,直接使用原始样本或简单裂解产物作为模板。
♦ 高灵敏度,即使微量样本也能获得清晰扩增条带。
♦ 广泛兼容,适用于小鼠基因型鉴定、转基因检测、病原体筛查等。
♦ 降低成本,减少提取试剂和耗材的使用,尤其适合高通量筛选。
图2. 直扩PCR扩增流程图
产品使用效果
血液直扩PCR(N132022)
适用样本:含EDTA、肝素、柠檬酸盐等常规抗凝剂的新鲜血液、冷藏(冻)血液及其他常见血液样本。
产品优势:扩增速度快,仅需3-10 sec/kb;不同浓度血液模板耐受性强。
8kb片段扩增速度可达10 sec/kb
图3. 使用N132022直接从人全血中扩增不同长度DNA片段。
血样为-20℃储存的EDTA抗凝血,血液模板浓度为10%,
延伸时间设置10 sec/kb。M为电泳marker。
不同浓度血液模板耐受性强
图4 A. 使用N132022直接从人EDTA抗凝全血中扩增2 kb长度、GC含量71%的DNA片段。血液模板浓度设置梯度0.5-50%,延伸时间为10 sec/kb。B. 使用N132022直接从小鼠EDTA抗凝全血中扩增2.2 kb长度、GC含量67%的DNA片段。血液模板浓度设置0.5-50%,延伸时间为10 sec/kb。M为marker。
小鼠组织直扩PCR(N132021)
适用样本:小鼠组织(如鼠尾、鼠耳、鼠趾等)。
产品优势:对样本投入量要求低,仅需5 mg小鼠组织或1-5 mm鼠尾。
模板兼容性广泛
图5. 使用N132021直接裂解(70℃裂解10 min)
扩增人293细胞、唾液、头皮组织,均有明显的目的条带。
与竞品相比,扩增速度快,产量高
1. 质粒 N132021 1 kb;2. T品牌 鼠耳 1 kb;3. T品牌鼠尾 1 kb;4. T品牌鼠趾 1 kb;5-6. N132021 鼠耳 1 kb;7-8. N132021 鼠尾 1 kb;9-10. N132021 鼠趾 1 kb;11. 质粒 N132021 2 kb;12. T品牌鼠尾 2 kb;13. T品牌鼠耳 2 kb;14. T品牌鼠趾 2 kb;15-16. N132021 鼠耳 2 kb;17-18. N132021 鼠尾 2 kb;19-20. N132021 鼠趾 2 kb
图6. 使用N132021和T品牌产品裂解不同组织扩增不同大小的目的片段,N132021延伸速率为5 sec/kb,T品牌延伸速率60 sec/kb。(70℃裂解10 min)
植物直扩PCR(N132023)
适用样本:水稻、大豆、玉米、拟南芥等植物的叶片、种子。
产品优势:裂解样本快,不同类型样本均能高效扩增。
不同类型植物叶片扩增效率高
图7. 使用N132023扩增不同类型植物叶片结果。
M:100 bp DNA ladder。C:相应植物纯化基因组DNA为模板。1-2:叶片组织裂解产物为模板。循环数:30个循环。
直接PCR技术的出现,让基因检测告别了冗长的DNA提取步骤,实验流程更简单、更快速。无论是科研还是临床检测,它都能帮助研究者节省时间、减少误差、提高效率。
如果你还在为繁琐的核酸提取而烦恼,不妨试试直接PCR试剂盒,让实验变得更轻松!
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