关于DIFF假病毒

假病毒（Pseudovirus）是指经过改造后的病毒颗粒。将病毒颗粒进行人工改造，保留其部分特性的同时，成为无致病性的假病毒颗粒。在病毒性传染病防治过程中，通过小分子、中和抗体等抑制病毒入侵细胞是关键的一环，假病毒在这一过程的研究中具有独特的优势。

相对于“真”病毒，其安全性高，即使是高危病毒种对应的假病毒，也不需要在高生物安全等级（BSL 3/ BSL4）实验室操作。迪福润丝生物通过插入报告基因eGFP或Luciferase形成了H5N1高致病性禽流感的假病毒，增强了结果读取的便捷性、客观性，适合批量检测。相对于ELISA等方法，假病毒更高的仿真度，可以更好地模拟感染的真实过程，增强结果可信性。

H5N1仍需持续监测和预防

H5N1禽流感自1997年首次在香港爆发（首次发现H5N1感染人类）以来，发生了几次重要的爆发事件，但尚未引发全球性大流行。2024年美国农业部首度宣布，从堪萨斯州的两个农场和得克萨斯州的两个农场采集的奶牛样本中（图1），检测出了高致病性禽流感（H5N1）阳性。随后，美国多达九个州的奶牛群均发现了禽流感疫情，近期陆续已在50多种动物身上检测到了H5N1病毒株。

图1. 美国CDC警告得克萨斯州出现H5N1禽流感牛传人事件

H5N1禽流感具有极高的高致死率，约为60%。尽管人际传播非常有限，但一旦感染，病情可能迅速恶化，导致肺炎、呼吸衰竭和多器官衰竭。在传播范围上，H5N1不仅会在家禽中传播，还能通过野生鸟类跨国传播，对全球禽类养殖业造成巨大经济损失，并构成全球公共卫生威胁。另外，H5N1病毒具有较高的突变率，其潜在的变异能力可能使其更容易在人类之间传播，从而引发大规模流行。

DIFF H5N1假病毒应用场景

‌DIFF H5N1假病毒为研究H5N1禽流感病毒提供了安全、高效的体外药物筛选平台，‌H5N1假病毒技术通过模拟病毒感染早期过程，安全性好，因此被广泛应用于抗病毒药物的筛选中。其表面蛋白构象结构与天然H5N1病毒相似，可以模拟病毒入侵和感染的机制。‌DIFF H5N1假病毒技术可针对H5N1血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）蛋白靶点进行药物有效性评价。

另一方面，DIFF H5N1假病毒还可用于评价血清样本中H5N1禽流感病毒活性的影响及其机制（图2），为药物在体外对H5N1禽流感病毒活性的评价提供了新的方法（图3）。

图2. DIFF H5N1假病毒中和实验结果示例

图3. DIFF H5N1假病毒中和实验抑制率曲线示例

对每孔计数后可计算感染抑制率，根据抑制率可作图如下，得知1/10 阳性血

清的NT50 为1/229，故该阳性血清的NT50 为1/2290。

此外，假病毒作为ELISA试剂盒原料通常用于研究抗体反应、疫苗效果评估等。DIFF H5N1假病毒可以作为ELISA（酶联免疫吸附试验）试剂盒的原料，假病毒中保留的表面蛋白HA蛋白可以作为检测抗原，用于ELISA中进行定量分析。DIFF假病毒具备良好的安全性、稳定性和抗原表达能力，适合用于检测工具中。

DIFF H5N1假病毒产品及服务信息

迪福润丝生物自有的CRO服务平台「DIFF+」可利用DIFF H5N1假病毒提供基于荧光斑点计数法的中和抗体检测服务，服务流程（图4）如下：

图4. 中和抗体检测流程图

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DIFF H5N1假病毒产品库：

迪福润丝生物构建的DIFF H5N1假病毒基于2024最新从德克萨斯州农场工人（A/Texas/37/2024）中分离出的甲型H5N1病毒，病毒HA被鉴定为分支2.3.4.4b A（H5），根据最新的研究，该病毒序列中暂时没有发现与流感抗病毒耐药性相关的标志物。

 服务内容

假病毒稳定性验证

DIFF H5N1假病毒稳定性优异，稳定性验证实验（图5、6）如下：选择鸡阳性血清进行4次重复，阴性血清进行2次重复，位于两块96板上，实验每孔读取结果和计数结果如下：

图5、6. 稳定性验证（板1：B/C列为阳性血清1；D/E列为阳性血清2；F/G列为阴性血清1；板2：B/C列为阳性血清3；D/E列为阳性血清4；F/G列为阴性血清2）

图7. 4个阳性血清样本中和实验抑制率曲线

结果可知，阴性血清对H5N1假病毒无中和效果，阳性血清若用Reed Muench法计算则四个重复NT₅₀皆为1/933，阳性血清若用荧光斑点计数法得到NT₅₀如上图（图7）。