In cell western assay(ICW) 分析是在细胞微孔板中进行的免疫定量荧光分析(96或384孔),结合了Western Blot的特异性和ELISA的可重复性和高通量。微孔板内的细胞经过固定、透化、一抗、二抗孵育、洗涤等步骤后,即可进行微孔板扫描成像,实现对细胞内目标蛋白的精确定量。
抗原抗体原位结合,无需抽提蛋白,无需进行裂解细胞、制胶、电泳、转膜等步骤,不仅节省了大量时间,而且大大提升了实验通量和重复性。可直接检测细胞内蛋白水平,磷酸化水平,受体活化水平等。拥有原位杂交,通量高,高度可重复等优点。远优于传统Western Blot,在药物筛选,RNAi研究等方面具有非常好的。
爱思益普拥有LI-COR公司的OdysseyDLx双色红外荧光成像平台,该平台具有685nm和785nm激发波长的两个独立的红外激光器,分别激发两种红外荧光染料,产生720nm和820nm的发射光,然后由两个高灵敏度雪崩式光电二极管检测器同时检测荧光信号。
本平台除了可进行ICW试验,也可应用于普通的蛋白杂交实验、凝胶迁移实验和蛋白均一化实验等等。与常规的检测方式具有以下优点:
1)检测准确:直接检测,无需加酶底物,非酶动力学反应,检测的信号强度和结合的二抗数量具有线性关系,保证定量的准确性
2)灵敏度高:PVDF膜和NC膜在可见光范围内其自发荧光较强,使较低丰度 蛋白条带荧光信号被掩盖,使用近红外时避开了背景荧光信号的干扰, 因此灵敏度更高。
3)双色检测,同时成像:保障相同的杂交条件,结果同时输出,直接比对,减少误差。