单抗亚型为什么都是IgM?
做单抗的朋友都不喜欢筛到分泌IgM亚型的细胞株,主要原因是IgM不溶于水,形成五聚体,纯化困难,实验者都对其避之不及;但是过五关斩六将筛选出来的抗体如果都是IgM亚型的,这个时候往往是“弃之可惜,食之扎胃”。
单抗筛选到IgM亚型,跟免疫的抗原性质,免疫佐剂,免疫程序和融合的试剂,甚至与动物本身都有很大的关系;以上的这些因素大部分是偶然性的因素,只对某些项目,或某个因素的偶然性有关系,一般来说排除的难度很大。做单抗行业的有一句话:“你筛选什么就得到什么?”,本文主要介绍如何让在筛选阶段就完美避开IgM。
单抗的筛选,特别是融合之后的初次筛选,我们应用的筛选方法基本上都是间接ELISA方法,基本流程如下:包被抗原-细胞上清-羊抗小鼠二抗-TMB底物显色。这个过程的基本原理是,细胞上清中的抗体与抗原结合,羊抗小鼠二抗再与抗体结合;其中的羊抗小鼠二抗是针对所有亚型的小鼠抗体的,当然包括针对IgM亚型的。顺着这个逻辑走下去,我们如果把二抗中针对IgM亚型的抗体去除,那么我们在筛选中就筛不到针对IgM亚型了,为了解决这个问题我们新推出的一款二抗:FrdbioRHRP标记羊抗小鼠IgGs△IgM(Cat. No.SAB9010△6),使用这个二抗进行单抗筛选得到的细胞株就不会有IgM,只不过成本略微偏高;当然,如果我们指定要筛选某个亚型单抗可不可以?可以,我们就使用HRP标记羊抗小鼠独特亚型(IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3)二抗,这些二抗也是单抗抗体亚型鉴定需要用到的。
是不是有了这些二抗利器,我们的单抗筛选就是无往而不利了?显然不是,Frdbio研发部门总结大量的案例发现,针对某些抗原的单抗无论你怎么筛选,好的抗体偏偏就是IgM,如果非要强行用HRP标记羊抗小鼠IgGs△IgM筛选,可能什么也得不到,最后只能不甘心地选择IgM。