使用前仔细阅读本说明书。本酶联免疫试剂盒是基于双抗体夹心技术原理,来检测小鼠组织蛋白酶E(CTSE),只能用于研究用途,不得用于医学诊断。
用 途:用于小鼠血清、血浆及相关液体样本中组织蛋白酶E(CTSE)测定。
工作原理
本试剂盒采用的是生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定样品中小鼠组织蛋白酶E(CTSE)水平。向预先包被了小鼠组织蛋白酶E(CTSE)单克隆抗体的酶标孔中加入小鼠组织蛋白酶E(CTSE),温育;温育后,加入生物素标记的抗组织蛋白酶E(CTSE)抗体。再与链霉亲和素-HRP结合,形成免疫复合物,再经过温育和洗涤,去除未结合的酶,然后加入底物A、B,产生蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中小鼠组织蛋白酶E(CTSE)的浓度呈正相关。
试剂盒组成
试剂盒组成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存 |
说明书 | 1份 | 1份 |
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封板膜 | 2片(48) | 2片(96) |
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密封袋 | 1个 | 1个 |
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酶标包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃保存 |
标准品320pg/ml | 0.5ml×1瓶 | 0.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
标准品稀释液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
链霉亲和素-HRP | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
生物素标记的抗CTSE抗体 | 0.5ml×1瓶 | 1 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
显色剂A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
显色剂B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
终止液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
浓缩洗涤液 | (20ml×20倍)×1瓶 | (20ml×30倍)×1瓶 | 2-8℃保存 |
需要而未提供的试剂和器材
1. 37℃恒温箱。
2. 标准规格酶标仪。
3. 精密移液器及一次性吸头
4. 蒸馏水,
5. 一次性试管
6. 吸水纸
注意事项
1. 从2-8℃取出的试剂盒,在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差
3. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
4. 为避免交叉污染,要避免重复使用手中的吸头和封板膜。
5. 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
6. 底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。
洗板方法
手工洗板方法:甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内,浸泡1-2分钟。根据需要,重复此过程数次。
自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中
标本要求
1.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
2.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。
操作程序
1. 标准品的稀释:(本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。)
160pg/ml | 5号标准品 | 120μl的原倍标准品加入120μl标准品稀释液 |
80pg/ml | 4号标准品 | 120μl的5号标准品加入120μl标准品稀释液 |
40pg/ml | 3号标准品 | 120μl的4号标准品加入120μl标准品稀释液 |
20pg/ml | 2号标准品 | 120μl的3号标准品加入120μl标准品稀释液 |
10pg/ml | 1号标准品 | 120μl的2号标准品加入120μl标准品稀释液 |
2. 根据代测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。
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